猪肝酯酶在大肠杆菌中的异源表达开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1.猪肝酯酶的简介

猪肝酯酶 (pig liver esterase，简称ple) 是从猪肝中提取出来的一种羧酸酯水解酶，具有很强的手性选择能力，能选择性水解羧酸酯，已广泛应用于光学活性醇或羧酸的合成^[1]。猪肝酯酶生化提取物是由α，β，γ三种同工酶组成的复合物，分子量在16300-16800 da之间。其中α-ple同工酶以催化酰基为长链脂肪酸的羧酸酯为主，γ-ple同工酶则主要催化酰基为芳环的羧酸酯^[2]。由于同工酶的底物特异性和立体选择性上的差异,使混合物表现出广泛的底物特异性。在masakiyo tkako等^[3]的研究中发现它催化部位的肤段为- x - cys - pro -thr - ser - asn - x -。但不同的同工酶c-末端结构或活性部位催化的氨基酸有所不同，这可能是导致ple底物具有广泛性的原因。现在商业上一般以ple表示自然提取而未经分离的ple同工酶混合物，以chiraxymee-1和chirazymee-2各表示经分离提纯而得到的ple中的两种单一酶组分。

表一 ple三种单体的生化性质比较^{[4] _{（见附件）}}

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

要研究解决的问题

1. 构建猪肝酯酶的重组载体，并导入大肠感受态细胞，实现猪肝酯酶在大肠杆菌中的异源表达

2. 对于构建的猪肝酯酶菌株，进行诱导表达条件的优化，如：诱导温度，诱导时间，诱导剂的添加量，促进蛋白的正确折叠，提高猪肝酯酶的表达量及酶活。