CRISPR/Cas9系统用于敲除大肠杆菌lacZ基因开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

crispr/cas9基因敲除系统

1. 基因敲除

基因敲除(knockout)是指一种遗传工程技术，针对某个序列已知但功能未知的序列，改变生物的遗传基因，令特定的基因功能丧失作用，从而使部分功能被屏障，并可进一步对生物体造成影响，进而推测出该基因的生物学功能。基因敲除和基因嵌入技术是上个世纪90年代出现的最新外源dna导入技术。基因敲除是基因打靶技术的一种，类似于基因的同源重组。指外源dna与受体细胞基因组中序列相同或相近的基因发生同源重组，从而代替受体细胞基因组中的相同/相似的基因序列，整合入受体细胞的基因组中。此法可产生精确的基因突变，也可正确纠正机体的基因突变。基因嵌入又称基因置换，它是利用内源基因序列两侧或外面的断裂点，用同源序列的目的基因整个置换内源基因。功能基因组学的研究进展使基因敲除技术显得尤为重要。基因敲除技术从载体构建到细胞的筛选到动物模型的建立各方面都得到了发展,此外,进退策略、双置换法、标记和交换法、重组酶介导的盒子交换法也从不同方向发展了基因敲除技术^[1]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

一：本课题要研究的内容

crispr/cas9靶向基因改造技术是最新发展起来的一种用于基因组编辑的分子生物学工具，现已广泛应用于多种动植物及微生物基因组的遗传学改造。

本设计以大肠杆菌为研究对象，选择基因工程实验中的一个常用的标记基因lacz基因，通过分析大肠杆菌lacz基因序列并设计靶向lacz基因的grna序列，构建相关基因敲除载体，转化大肠杆菌感受态细胞，经细菌培养、抗生素药物筛选得到候选克隆，运用pcr、测序及lacz酶活性测定等对候选克隆进行分析,探讨crispr/cas9系统用于基因敲除改造大肠杆菌的实验方案。