急性淋巴白血病动物模型建立和检测初探开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述）

研究意义：急性淋巴性白血病（all）是一种造血系统恶性疾病，其特征为淋巴母细胞失调增生和分化异常或分化受阻，从而形成大量未成熟白细胞。急性淋巴性白血病占儿童白血病的80%，发病率高峰在3岁至7岁之间，也可发生于成年人，占所有成年人白血病的20%。目前，药物治疗是治疗该白血病最常用的方法，但大多数药物对正常细胞仍有杀伤作用。如何提高药物的选择性已经成为当今研究的热门。在药物的筛选评价过程中，许多实验不能在人体上直接进行，因而需要借助实验动物，在严格控制有关条件的情况下，进行生命的反应特征、疾病发生发展规律以及药物规律等基础实验研究，然后进一步作临床观察，以寻找预防治疗疾病的有效措施。应用动物模型间接研究人类疾病，即可克服某些疾病临床研究的困难，解决以人作为实验对象在伦理道德和方法学上的诸多问题，又可避免临床经验的局限性。动物模型已经成为现代医学科学及中医药学深入发展不可缺少的工具。

通过文献调研，目前白血病动物模型建立的方法主要有，皮下移植瘤模型和血液模型。皮下移植瘤模型相对于血液模型较容易建立，且技术较为成熟，可动态观察接种肿瘤体积的变化趋势，以及准确评价抗癌药物的药效特点；血液模型，是将人源性白血病细胞接种于机体免疫系统受到打击的免疫缺陷小鼠，使其在血液内和全身组织中繁殖，一般以生存天数作为观察终点；该模型与白血病患者的病理生理状况较为接近，但终点指标受多种因素的影响，实验难度较大。而且免疫缺陷小鼠饲养条件苛刻，成活率较低，不适宜作为稳定的动物模型对象。因此，我们可以选择生存能力较强的实验动物，通过建立免疫抑制模型，为白血病动物模型的建立进行初步的探究。

研究目的：

2. 研究的基本内容与方案

基本内容：

1. 学习实验动物学及临床血液学基本知识；

2. 掌握人和小鼠的血象和骨髓象的检查方法；

3. 建立小鼠免疫抑制模型；

4. 对比正常和诱导剂处理后的小鼠血象和骨髓象并分析数据；

5. 建立急性淋巴性白血病动物模型的标准参数。

技术方案：

1、小鼠的挑选、饲养

选用昆明种小鼠，4周龄，体重18~22g，全部为雄性；每只日采食量一般为2.8~7.0g,采取少量勤添的饲喂方式；保持充足清洁饮水，每周换水2~3次，每只4~7ml/d。

2、小鼠分组及处理

挑选饲养2只小鼠，2~3天之后取血、取骨髓，涂片，瑞士染色法做显微镜观察，观察血液中红细胞、白细胞的大小形态及数量；骨髓有核细胞种类，特殊细胞及其他情况。

另挑选8只小鼠，将小鼠平均分为2组，Ⅰ组为对照组，Ⅱ组为实验组。实验组小鼠腹腔注射诱导剂80mg/kg,每日一次，连续3天；对照组小鼠腹腔注射相同剂量的注射用水,每日一次，连续3天。

3、小鼠形态观察

定时观察实验组小鼠与对照组相比的身体变化，包括精神状况、食欲、体重等指标。

4、血涂片、骨髓涂片的镜检

于第4、7、10、13天取实验组和对照组各一只，取血，通过血象数据初步判断小鼠诱导情况，若诱导成功，取骨髓，涂片染色，显微镜观察，观察血液中白细胞和骨髓有核细胞数量变化及有无畸形细胞等。

（1）血涂片的镜检 取血前用乙醚麻醉小鼠直至呼吸急促，四肢松弛。小鼠仰卧位固定，减去胸前区被毛，皮肤消毒后，用左手食指在左侧第3~4肋间触摸到心搏处，右手持带有4~5号针头的注射器，选择心搏最强处穿刺，当刺中心脏时，血液会自动进入注射器。每次采血量0.5~0.6ml。制备血涂片，显微镜下观察血相。（2）骨髓涂片的镜检 将小鼠处死、固定，解剖取出肋骨或胸骨，于第3胸骨节处剪断，将其剪断面的骨髓挤在有稀释液的玻片上，继而涂片、染色、镜检。

（2）骨髓涂片的镜检 将小鼠处死、固定，解剖取出肋骨或胸骨，于第3胸骨节处剪断，将其剪断面的骨髓挤在有稀释液的玻片上，继而涂片、染色、镜检。

设计流程图：

3. 研究计划与安排

第1-3周：查阅相关文献资料，明确研究内容，了解课

题的研究现状。完成实验室的布置工作。确

定方案，完成开题报告。

4. 参考文献（12篇以上）

[1]. Barta S K, Yiyu Z, John S, et al. Synergy of sequential administration of a deglycosylated ricin A chain-containing combined anti-CD19 and anti-CD22 immunotoxin (Combotox) and cytarabine in a murine model of advanced acute lymphoblastic leukemia.[J]. Leukemia Lymphoma, 2012, 53(10):1999-2003.