湖北海棠叶活性成分及质量标准研究开题报告

1. 研究目的与意义

湖北海棠属蔷薇科苹果属植物，是一种传统的药食两用植物。主产于湖北西部海拔在1 500 ～ 2600 m 的山林地区，广泛分布在河南、四川、江西等地，又名花红茶(湖北)、野海棠(河南)、野花红(浙江)、秋子(四川)、茶海棠(中国植物图谱)等。湖北海棠的嫩叶晒干可作茶叶饮用，其叶和果实可入药，用于治疗食积停滞、消化不良、痢疾、疳积等症。

湖北海棠含有丰富的蛋白质、茶多酚、黄酮类物质和多种微量元素，具有抗氧化、降血糖、抗疲劳、保肝等药理活性，可作为提取根皮苷的原料，也是研制治疗糖尿病药物的潜在植物资源，在药品、饮料和保健食品的开发利用方面具有广阔的前景。通过综合分析湖北海棠的化学成分、药理活性和毒性研究进展，为该药材的进一步研究和开发提供参考。

2. 课题关键问题和重难点

湖北海棠成分较杂且无法对液相图谱峰型进行准确标定，只能采取多次调整流动相比例来确定单峰为一特定成分。且多数成分极性较大，水溶性特别好。硅胶柱粗分及结晶等常规手段不易将其分离纯化故多采取大孔树脂、凝胶柱及液相制备等手段做个体针对性分离，液相条件多采取10%左右乙腈或甲醇进行液相制备，故制备完后对单体成分进行浓缩耗费时间比较长同时由于长时间加热，单体成分容易遭到破坏。在对纯化后的单体成分进行核磁结构鉴定时由于多数成分水溶性特好，常规溶剂如甲醇、DMSO等无法将其溶解，只能采用重水进行溶解，做出来的图谱比较杂乱难以解析。

3. 国内外研究现状（文献综述）

（一）研究背景

湖北海棠，蔷薇科苹果属落叶小乔木，拉丁名：malus hupehensis(pamp.)rehd.主产于湖北，海拔50-2900m。在云南、江苏、浙江、河南、江西、四川^[1]等地均有栽培；其适应性极强，喜光、抗旱、抗盐、耐涝，对病虫灾害亦有抗性，同时可承受零下21度的低温。

海棠具有利尿、消渴、健胃的功能。海棠也可以治疗泌尿系统疾病，并是其中的主药之一。其果实有驱风顺气、舒筋止痛、解酒去痰、煨食止痢等其他功效。其入药可用于食积停滞、消化不良、痢疾、疳积等症^[2]。

4. 研究方案

外购药材取清液过大孔树脂AB-8柱，流出液根据点板液相跟踪合并过sephadex LH-20进行粗分，合并流份进行液相检测，根据液相图谱选择流动相和样品进行液相制备单体分离，制备后纯品直接冻干，不纯的单体根据液相图谱等综合考虑选用凝胶柱或者二次制备进行精制。

5. 工作计划

购进药材提取液，进行小试：上大孔树脂AB-8柱，根据点板及液相分析。取根皮苷部分浓缩上sephadexLH-20柱，30%甲醇洗脱，点板至无点，改用50%甲醇洗脱得根皮苷粗品，后经制备得到根皮苷，经冻干得根皮苷白色冻干粉。

100kg提取液上柱，经大孔树脂AB-8柱乙醇梯度洗脱，流出液点板分段合并，液相跟踪进行后续处理。取20%乙醇部分1/10通过自制反相柱甲醇梯度洗脱分离成七个部分，后续各部分进行单体分离。取反相柱后第五份，用10%乙腈 0.1%磷酸制备，根据液相跟踪将制备液分为8份。从第（6）份中得到HBHT-2。第（5）份过凝胶柱继续纯化，后得到HBHT-9。取反相柱后第一份，液相制备可得HBHT-5。取反相柱后第四份，上sephadexLH-20柱洗脱，流出液点板合并，检测跟踪。凝胶柱下第4份在10%甲醇洗脱下得到HBHT-11。