胸腺法新纯化工艺参数研究开题报告

1. 研究目的与意义

胸腺法新 (thymosin α1，也称胸腺肽 α1) 是胸腺素主要生物活性成分，为体内重要免疫调节物质，是氮端乙酰化的 28 个氨基酸组成的多肽。研究表明，胸腺法新促进骨 髓干细胞发育分化为原淋巴细胞及前淋巴细胞；诱导 t 淋巴细胞分化与成熟，使已成熟的 t 细胞进一步分化为几个不同的亚群，如杀伤细胞、记忆细胞、效应细胞、辅导 t 淋巴细胞 等，并产生各种可溶性介质 ；增强淋巴细胞对有丝分裂素的反应，并可增加淋巴组织的蛋白 质和核酸的合成；增加 r-ifn、a-ifn、il-2、il-3 和淋巴毒素的生成，增强抗病毒和抗肿瘤 的免疫反应 ；抑制自身免疫反应；恢复抑制性t细胞的功能。目前胸腺法新已被广泛应用于 临床，治疗多种疾病，如用于慢性乙型肝炎的治疗 ；用于丙型肝炎、肝细胞癌、恶性黑色素瘤的治疗 ；用于治疗感染性疾病、自身免疫性疾病、恶性肿瘤等的治疗。

有关合成胸腺法新的纯化，国内已有多个专利进行的报道。 中国专利 cn201210052504 公开了一种胸腺法新的纯化方法，具体步骤包括活性炭吸附过滤、中性氧 化铝色谱柱分离、超滤膜浓缩、乙醚沉降离心洗涤、干燥。

中国专利 cn201110186259 采用反相 c18 填料，依次采用 0.1%tfa/ 乙腈、0.2% 磷 酸 / 乙腈和水 / 乙腈分别对胸腺法新粗肽进行第一次、第二次纯化和转盐制备。产品冻干后纯度达 99% 以上。

2. 研究内容和预期目标

1. 1.学习多肽纯化的基础知识，掌握高效液相色谱仪器的基本操作方法。

2. 2.对胸腺法新纯化制备流动相、制备填料的选择进行研究，并研究纯化过程中相关杂质的控制方法，最终确定最优工艺。

3.分析胸腺法新的纯化工艺对肽的纯度及有关杂质的控制效果，并通过比较纯化总收率做相关的评估。

3. 研究的方法与步骤

胸腺法新纯化工艺采用高压液相反相柱梯度洗脱的方法，样品溶液中的各组分具有物理化学性质的微小差异，当流动相进入色谱柱后，便在柱的两相之间产生不同的相互作用力。随着流动相的连续推移，这种微小的差异被扩大，在柱内出现明显不同的迁移距离最终达到组分的完全分离。在组分分离的过程中流动相和填料的选择对组分分离的效果影响最大。本实验将针对以上两个因素展开对比实验。

对比胸腺法新纯化过程中用到的两种流动相对关键杂质的分离效果：分别以磷酸氨水和tfa为流动相，对比两种流动对不同杂质的分离效果。

对比大曹和菲罗门填料对杂质的分离情况，分析填料对不同杂质的分离效果。

4. 参考文献

[1] 赵群,司继刚,曹原. 胸腺法新的临床应用进展[j]. 中国药房, 2015,26(23):3304-3306

[2] 孟钢;孙艳艳.同规格不同生产厂家的色谱柱对胸腺法新有关物质测定结果的影响[j]. 生物技术世界. 2013,(2):75-76

[3] 路杨,杨东晖,陈晓航.一种胸腺法新的纯化方法[p].中国专利,201310399935.7

5. 计划与进度安排

（1）2022年12月：毕业论文选题。

（2）2022年2月下旬：查阅文献，制定实验方案

（3）2022年3月-2022年4月：进行实验。