融合标签介导蛛丝蛋白嵌合体（NTR4CT）在大肠杆菌中的可溶性表达开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

蜘蛛是节肢动物门蛛形纲蜘蛛目动物的统称，大多数蜘蛛都可以编制蛛网，蜘蛛丝是一种极高的强度和韧性的天然蛋白纤维，具有高弹性、高断裂能等机械性能以及显著的可降解性、组织容性等生物学特征，可运用于生物医学、材料、军事等领域，有极高的实用价值的生物材料，利用原核或真核表达系统表达蜘蛛丝蛋白可以大量获取蜘蛛丝。

蜘蛛在漫长的进化过程中，逐渐进化产生多种蜘蛛丝，不同种类的蜘蛛丝，在蜘蛛不同的生命阶段中承担着不同任务和功能。

蜘蛛丝的种类大致分为5类：主壶腹腺丝、次壶腹腺丝、鞭毛状腺丝、葡萄状腺丝、管状腺丝。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

1、主要研究内容及关键技术本课题基于新型融合标签技术针对蜘蛛丝蛋白在大肠杆菌中难以表达的问题，采用融合蛋白的技术，优化表达条件，实现蛛丝蛋白在大肠杆菌中的高效可溶性表达，获得人工水溶性蛛丝蛋白原液。

该法为工业化生产蛛丝蛋白奠定了良好的基础。

其主要研究内容及关键技术包括：（1）重组菌构建（2）蛛丝蛋白表达条件优化（3）蛛丝蛋白纯化2、拟采取的研究方法、技术路线、实施方案及可行性分析（1）研究方法① 分子生物学：密码子优化后合成蛛丝蛋白的碱基序列，设计合适的引物，采用迭代聚合策略，选用兼容但不可再生的限制性酶切位点nhei和spei，构建多倍串联体。