草坪币斑病菌对异菌脲、咯菌腈的抗药性研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、本课题意义币斑病（dollar spot，ds）作为一种重要的、分布广泛的草坪真菌病害，自1932年由monteith和dahl首次在美国发现并报道以后，现已在澳洲、欧洲、中国、日本等全球各地都有相关报道发现。

币斑病菌（sclerotinia homoeocarpa f.t.bennett）除可侵染多种冷季型和暖季型草坪草，还可侵染豆科、石竹科、莎草科在内的500多种植物，对多种草坪草造成危害，其中对于高尔夫球场的球道、果岭等低修剪草坪危害尤为严重。

20世纪90年代中后期，我国部分球场零星出现了币斑病症状，到2007年，币斑病在我国南北各地大面积发生。

2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标分析币斑病菌对异菌脲和咯菌腈的抗性分子机理，为币斑病菌的科学防治和抗药性治理提供科学依据，从而有效、科学地防治草坪币斑病。

二、研究内容1.币斑病菌抗药性检测：选取采集的币斑病菌，通过敏感性测定确定其是否对异菌脲和咯菌腈产生抗药性，从而筛选出已产生抗药性的田间抗性菌株。

2.田间抗性菌株生物学性状的测定（1）菌丝生长速率（2）致病力（3）温度敏感性（4）竞争力3.抗性相关基因的扩增以筛选出的田间抗性菌株的基因组为模板，对与抗性相关的基因进行pcr扩增，将pcr扩增产物纯化后测序可获得相应序列片段，与未产生抗性的菌株序列进行对比，从而分析出币斑病菌对异菌脲和咯菌腈抗性产生的分子机理。

3. 研究的方法与方案

一、研究方法1.菌株保存将采集的币斑病菌亲本使用20%甘油进行保存，置于4℃冰箱中长期保存。

2.病原菌抗药性检测活化保存菌株，将病原菌接种到带药平板上，对其进行敏感性测定获得币斑病菌对异菌脲和咯菌腈的田间抗性菌株。

3.生物学性状测定（1）菌丝生长速率：将田间抗性菌株接种到带药平板上，培养皿置于25℃恒温培养箱中黑暗培养2-3天，然后用十字交叉法测量菌落直径。

4. 研究创新点

本课题成功筛选获得了币斑病菌对异菌脲和咯菌腈的田间抗性菌株，并拟以此为研究材料，将开展币斑病菌对异菌脲和咯菌腈的抗性分子机理的研究，弥补国内有关币斑病菌抗药性分子机理研究的缺乏，为币斑病在国内的有效、科学防治提供参考。

5. 研究计划与进展

2017年9月2018年2月：活化前期保存菌株，进行对异菌脲和咯菌腈的抗药性检测，选出对异菌脲、咯菌腈的田间抗性菌株，并将田间抗性菌株也进行保存；2018年3月：测定田间抗性菌株的生物学性状，包括菌丝生长速率、致病力、温度敏感性、竞争力等；2018年4月：扩增田间抗性菌株的抗性相关基因，整理实验数据。

2018年5月：完成并按时提交论文。