药用白芍离体培养初步研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

芍药不但是我国名贵的观赏花卉，其根作为药用，在我国已有2000多年的历史[1]。

《中华人民共和国药典》2010年版[2]收载白芍为毛茛科植物芍药的paeonialactiflorapall.的干燥根。

白芍性味酸苦，微寒，入肝、脾经，有养血敛阴、平肝止痛、调和营卫之效，常用于血虚肝旺、胁痛、腹痛、月经不调之症[3]。

2. 研究的基本内容和问题

1研究目标本项目拟在建立白芍无菌快繁体系的基础上，采用离体同源四倍体诱导的方法获得白芍同源四倍体种质，并采用形态鉴别、根尖染色体鉴定相结合的方法对获得种质进行鉴定，建立同源四倍体株系，为药用白芍优良品种选育创制倍性育种材料。

2研究内容（1）建立白芍无菌快繁体系；（2）白芍同源四倍体的离体诱导与鉴定；（3）倍性鉴定。

3拟解决的关键问题（1）增殖培养基的选择直接通过芽增生的方式进行扩繁是目前芍药属植物组织培养的常用途径，基础培养基和植物生长调节剂的种类的数量都影响着白芍幼苗的生长和增殖情况，所以选择合适的培养基对于白芍的扩繁极为关键。

3. 研究的方法与方案

1 材料和方法(1)外植体消毒与接种以2014年9月份采自南京园林建设总公司白芍栽培基地的白芍种子为材料，剥去种皮，用洗洁精浸泡4 min，在自来水下冲洗20 min后，在超净工作台内用药剂进行表面消毒，方法如下：用75%酒精处理40 s，无菌水冲洗1次，然后用0.1 %升汞灭菌4 min，无菌水冲洗3次，每次不少于3 min。

将白芍种子分成a、b两组，a组为ms培养基，b组为ms 6-ba 0.5 mgl-1 ga31.0 mgl-1 ，各接种若干种子。

(2)白芍无菌苗的培养与增殖将获得的白芍无菌苗进行增殖，对培养基进行了调整，将幼苗转接到1/2ms (ca2 加倍) 6-ba0.5 mgl-1 ga31.0mgl-1的培养基中，进行芽的诱导，观察生长情况，并每30-40天进行一次增殖，获得较多数量的白芍二倍体幼苗(3)秋水仙素诱导以30个白芍芽为1组，设置6组，秋水仙素浓度分别为0.05%、0.1%、0.2%进行诱导，诱导时间设置12 h和24 h，置于摇床中不断振摇，之后接种到基础培养基当中进行培养，待幼苗长根后进行根尖染色体鉴定。

4. 研究创新点

(1)材料创新经过系统CNKI中国知网数据库系统系统检索，未见关于药用白芍同源四倍体种质的报道（2）技术创新本研究在建立无菌快繁体系的基础上进行白芍同源四倍体的诱导，一方面可以通过无菌快繁可以提供大的可供诱导的实验材料，提高了工作效率，另一方面，采用离体诱导的方法可以减少诱导过程中嵌合体的产生，增大了实验的成功率。

5. 研究计划与进展

2015.12-2016.2 将白芍二倍体无菌系扩繁；2016.3-2016.4 对二倍体植株进行秋水仙素诱导；2016.5 对同源四倍体倍性种质进行鉴定；2016.6 扩大繁殖建立四倍体株系。