UPLC法测定法罗培南钠中的有关物质开题报告

1. 研究目的与意义

研究内容：

1.文献研究

2.初步确定测定法罗培南钠的液相条件

2. 文献综述

法罗培南钠的研究进展

摘要 法罗培南钠(faropenem sodium) 是青霉烯类中惟一既可口服又可注射的抗生素,它经由阻止细菌细胞壁合成而显现抗菌、杀菌作用,具有独特的药动学性质。其抗菌谱广泛,对厌氧G 菌及多数G-菌的抗菌活性均等同于或优于头孢菌素及青霉素类抗生素，并且对各种P-内酰胺酶都很稳定,较少产生耐药且不良反应少，广泛应用于临床各种感染。

关键词法罗培南钠；作用机制；临床应用；UPLC法

1.背景

感染性疾病是目前临床上最为常见的一类疾病,几乎涉及临床所有专科,也是引起患者死亡的最常见的原因之一。据世界卫生组织1997年报告,患感染性疾病死亡的人数高达各类原因死亡人数总和的33.3%^[1]。在我国,由于广大的农村人口以及相对落后的医疗保键系统,危害人民健康的主要疾病仍是由各种致病菌引起的感染性疾患,并且也是引起致残和死亡的主要原因。

抗感染药是人类与感染性疾病作斗争的有力武器,其数量最大、种类最多、发展最快,并且这方面药物的市场需求历来十分旺盛。据统计,抗感染类药物的销售额占世界药品销售额的15%左右,仅次于心血管类药物。在我国,抗感染药占整个药品销售14%左右的市场份额,在所有药品类型中名列第一^[3-4]。

法罗培南钠为青霉烯类抗生素,在青霉烯母核的2-位上接有一个四氧呋喃基团,化学结构较稳定。具有广谱抗菌活性,它对需氧和厌氧的革兰阳性菌、革兰阴性菌均显示出广谱的抗菌活性,特别是对耐药的葡萄球菌、肠球菌等革兰阳性菌和拟杆菌等厌氧菌的活性都优于现有的口服抗菌剂;但对绿脓杆菌的活性较弱。本品对各种P-内酰胺酶都很稳定,较少产生耐药。临床用于由葡萄球菌属,链球菌属,肺炎球菌,肠球菌,莫拉杆菌属,大肠菌,梓檬酸杆菌属,克雷白菌属,肠杆菌属,变形杆菌属,流感菌,消化链球菌属,丙酸杆菌,拟杆菌属等引起的各类感染。是青霉烯类中惟一的口服抗菌剂,具有广谱抗菌活性、与青霉素结合蛋白有很好的亲合力及良好的β-内酰胺酶稳定性^[5-8]。

2.法罗培南钠的作用机制

法罗培南对各种青霉素结合蛋白( PBP) 具有高亲和力，通过抑制细胞壁粘肽的合成，使细菌胞壁缺损，菌体膨胀，致使细菌胞浆渗透压改变和细胞溶解，从而达到抗菌杀菌作用。这些杀菌作用是受到四氢呋喃基侧链性质的影响。哺乳动物无细胞壁，所以不受法罗培南的影响，法罗培南对细菌有选择性杀菌作用，对人体毒性较小。法罗培南对许多细菌的B-内酰胺酶稳定,是由C6位上的1(R)羟乙基基团决定的。

有研究表明^[9]: 法罗培南与PBP的高亲和性与细菌细胞形态改变有着密切的关系。法罗培南与高分子质量PBP亲和力高,与低分子质量PBP则亲和力低。例如,对金黄色葡萄球菌、肺炎链球菌,法罗培南对PBP1高度亲和,其次是PBP3、PBP2。当金黄色葡萄球菌置于法罗培南的MIC的1/8或1/4时,金黄色葡萄球菌形成不规则隔膜。在1倍的MIC或更高时,大量的金黄色葡萄球菌溶解。这种由法罗培南所触发的细菌形态变化与所报道的与PBP的亲和力是一致的。这样对革兰阳性菌和革兰阴性菌,法罗培南对PBP高亲和性通过明显的浓度依赖的杀菌作用反映出来。

3.国内外临床研究

法罗培南钠是一种新型的β-内酰胺类抗生素，具有青霉烯结构，首先开发用于口服治疗社区获得性呼吸道感染^[10]，对呼吸道主要病原菌肺炎链球菌、流感嗜血菌和黏膜炎莫拉氏菌的抑菌活性研究表明，法罗培南钠对产 β-内酰胺的流血嗜血杆菌和黏膜炎拉莫氏菌都有效。同时，法罗培南钠用于治疗耳鼻咽喉科感染安全有效，对慢性中耳炎急性恶化病例有效率为62%，对慢性副鼻窦炎急性恶化病例有效率为 50%，对中耳炎、副鼻窦炎、咽喉头炎有效率分别为 62%、75%、100%，对中耳炎和扁桃体炎细菌清除率分别为60%和 67%^[11]。与其他 β-内酰胺类口服抗生素在治疗呼吸系统感染的有效性比较，法罗培南钠对肺炎、肺化脓症的疗效甚佳，对咽喉炎、扁桃体炎和急性支气管炎等症均具有高效。副作用及临床检查值异常与 β-内酰胺类抗生素无差异，仅软粪、腹泻发生率稍高，这是法罗培南钠对抗厌氧菌活性强的表现。李艳伟等^[12]将头孢克洛作为对照药物，对法罗培南钠治疗泌尿系统感染进行了疗效评价，结果表明，法罗培南钠钠和头孢克洛对泌尿系统感染均有较好的临床疗效和细菌学疗效。

4.UPLC法测定其有关物质

4.1溶液制备

4.1.1 原料药供试品溶液

精密称取法罗培南钠原料药10.0 mg，置10 ml 容量瓶中，用乙腈溶解（超声2分钟使其充分溶解），再加入少量水稀释至刻度，超声，直至溶液透明，得浓度为1.0 mg/ml的供试品溶液。

4.1.2原料药对照品溶液

精密称取法罗培南钠原料药对照品10.0 mg，置10 ml 容量瓶中，用乙腈溶解（超声2分钟使其充分溶解），再加入少量水稀释至刻度，超声，直至溶液透明，得浓度为1.0 mg/ml的对照品溶液。

4.1.3 空白溶液

取一10 ml容量瓶，向其中加入约3ml乙腈，再加水定容，混匀，得空白溶液。

4.2 波长的选择

取供试品溶液和空白溶液分别于紫外200~400nm 波长范围内扫描，结果法罗培南钠于305nm 波长处有最大吸收，空白溶剂在此波长处无吸收，确定305nm 为检测波长。

4.3 仪器与试剂

Waters H-Class高效液相色谱仪（美国沃特世公司）；PDA eλ阵列检测器（美国沃特世公司）；FTN自动进样系统；Empower3工作站；KQ-400DE型高频功率数控超声波清洗器（昆山市超声仪器有限公司）

乙腈（色谱纯，德国默克公司）、磷酸二氢钾（分析纯，国药集团化学试剂有限公司）、水为二次纯化水

4.4 色谱条件与方法

色谱柱：以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；检测波长：305nm；柱温：30℃；流速：1.0 ml/min；平衡时间：5min；流动相A：磷酸二氢钾缓冲液（20mmol/L磷酸二氢钾水溶液,用20mol/LNaoH溶液调pH值至6.0）；流动相B：乙腈；溶剂：乙腈（加少许水）；进样量：1μl；浓度：1 mg/ml。

梯度洗脱程序

5.小结

以上的测定方法只是暂定，在今后需要通过更换色谱柱厂家，色谱柱型号，改变梯度、柱温、流速以及流动相体系等方法，摸索并优化色谱条件。法罗培南钠具有抗菌谱广，耐药菌株少，安全性高等特点，其片剂已广泛应用于临床各种感染，其注射剂尚处于临床研究阶段。在临床应用过程中，我们应注意监测其不良反应的，相信随着研究的深入，法罗培南钠将更科学合理、更广泛的应用于临床。

参考文献

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[12]李艳伟，夏 天. 法罗培南钠钠治疗泌尿系统感染疗效评价[J].天津医药，2007（9）：715.

3. 设计方案和技术路线

查阅文献

初步制订法罗培南钠的有关物质测定方法

4. 工作计划

2017.02~2017.03查阅文献，设计实验

2017.03~2017.04 确定检测波长，进行实验方法优化

2017.05~2017.06 完成实验内容并撰写毕业论文

5. 难点与创新点

法罗培南钠(faropenem sodium)是青霉烯类中惟一既可口服又可注射的抗生素,具有广谱抗菌活性。目前,在各国药典中,仅《日本抗生素物质医药品基准解说》1998年版中有收载,但未列有关物质检查项目，故建立其有关物质含量的测定方法,对控制产品的质量非常必要。