竹节香附素A对人结肠癌细胞增殖的抑制作用开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

文 献 综 述竹节香附素a：1.化学名:olean-12-en-28-oic acid,3-[(o-6-deoxy-α-l-mannopyranosyl-(1→2)-0-β-d-glucopyranosyl-(1→2)-α-l-arabinopyranosyl)oxy]-(3β)-2.药物名称: raddeanin a3.分子式: c47h76o164.异名（中): 多被银莲花素 a,红背银莲花素 a5.异名（英): anemodeanin a6.分子量: 897.117.理化性质: 细针晶,mp242～244℃,[α]25/d-8(c=0.8,甲醇)。

ir γmaxcm\-1:3100～3600(oh),2900(ch),1697(cooh),1640(c=c),1465(ch3ch2),1398(oh),1365(ch3),1310,1230,1154,1120(羟基的c-o),1070,1050,1024,885,845(β-d及α-l-吡喃糖的吸收),810(吡喃环c-0-c),710。

1hnmr。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

竹节香附素a（银莲花素a）诱导人结肠癌细胞凋亡的分子机理研究目的：研究银莲花素a在体外对人结肠癌细胞的增殖抑制作用,并探讨其诱导细胞凋亡的分子机制。

方法：用mtt测定人结肠癌细胞sw480、hct116和lovo在不同药物浓度梯度的银莲花素a处理48 h后细胞活性,并以0.1%dmso作为阴性对照计算银莲花素a对细胞生长的抑制率与半数抑制浓度ic5o；然后,用不同浓度梯度的银莲花素a分别处理人结肠癌细胞lovo1 d、3 d、5 d后,绘制出lovo细胞的生长曲线；采用pi染色法流式细胞仪检测分析不同浓度(3个浓度梯度)银莲花素a处理人结肠癌细胞lovo(24 h)后细胞周期时相分布情况；利用倒置显微镜观察银莲花素a诱导人结肠癌细胞lovo凋亡的形态变化并dapi染色后观察其细胞凋亡的细胞核染色质变化情况；运用分光光度法测定银莲花素a处理人结肠癌细胞lovo(24 h)后caspase-3活性的改变；采用ripa裂解法提取药物处理后lovo细胞的总蛋白经western blot法检测parp、bim、p-44/42、p-jnk、xiap、survivin、bcl-2、bcl-x1和p-stat3的活性改变和线粒体与胞浆细胞色素c的表达情况；将载有survivin基因的质粒dna进行瞬时转染到lovo细胞中,经mtt检测细胞活性；在培养基中加入一定浓度的p-jnk的抑制剂sp10065与银莲花素a后,通过mtt法测定人结肠癌细胞lovo的活性。

结果：银莲花素a明显的抑制了人结肠癌细胞sw480、hct116和lovo增殖,48 h半数抑制浓度ic50分别为1.783μm(sw480)、1.338μm(hct116)、0.156μm (lovo) (p0.05),而且在14.00μm浓度均已经达到约90%的抑制率(p0.05),而且随着药物浓度和时间的增加其抑制作用更加显著；人结肠癌细胞lovo在不同浓度银莲花素a处理24 h后凋亡形态特征明显,dapi染色后细胞染色质固缩明显,而且凋亡碎片也清晰可见；银莲花素a使人结肠癌细胞lovo在g0/g1期的比例增加明显：与对照组相比,银莲花素a作用于人结肠癌细胞lovo明显激活parp、caspase-3、p-44/42、p-jnk、的活性,上调bim、下调xiap、survivin、bcl-2、bcl-x1和p-stat3的表达,在胞浆中细胞色素c的表达高于线粒体中,而且差异显著；用mtt检测,经转染有survivin基因的lovo细胞的活性明显高于对照组；加入p-jnk抑制剂sp10065后明显抑制了银莲花素a对人结肠癌细胞lovo的凋亡。