1．结合毕业设计（论文）课题情况，根据所查阅的文献资料，每人撰写

2000字左右的文献综述：

文 献 综 述

1.1益经颗粒的组成和相关知识

益经颗粒组要成分：熟地 白术 山药 当归 白芍 生枣仁 丹皮 沙参 柴胡 杜仲 人参

功能：滋阴养血，疏肝解郁

主治：肾虚肝郁所致经量明显减少，甚或点滴即净;或经期缩短，见经前烦躁易怒，经前乳房胀痛，腰漆酸软，带下量少等症。卵巢储备功能不足甚至卵巢早衰（肾虚肝郁证）证见上诉证候者。

1.2毛蕊花糖苷的相关知识

益经颗粒中主要物质为毛蕊花糖苷 (Acteoside; Verbascoside; Kusaginin) 别名麦角甾苷、毛蕊花苷。属于苯丙素苷类化合物分子式C29H36O15分子量624.5检测方式为高效液相色谱法≥98%，性状为白色针晶粉，相对密度，1.6g/cm3易溶于乙醇、甲醇、醋酸乙酯。[1]

毛蕊花糖苷

1.3药物代谢动力学和药理的相关知识

毛蕊花糖苷是我研究所经多年的研究开发，从地黄叶中经过提取、分离、精制得到的具有治疗慢性肾小球肾炎作用的活性化合物，是中国中医研究院中药研究所主持开发的多年研究成果，并于2000年获得国家科技部中央院所专项基金的资助，现已按国家食品药品监督管理局新药审批标准，完成了治疗慢性肾炎的机理研究；主要药效学实验；生产工艺实验(包括工业化提取分离工艺)；质量控制标准；质量影响因素实验；长期稳定性实验；大鼠急性毒性、长期毒性实验；致畸、致突变实验；一般药理学实验；药代动力学实验等临床前的研究工作。[2]

目的研究毛蕊花糖苷对D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑损伤的改善作用。方法建立D-半乳糖致亚急性衰老小鼠模型,以其学习、记忆成绩,免疫器官指数,脑中胆碱乙酰转移酶(ChAT)和乙酰胆碱酯酶(AchE)活性,小鼠海马CA1区细胞形态为指标,对毛蕊花糖苷改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑损伤的作用进行研究。[3]结果与模型组比较,毛蕊花糖苷可恢复D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的学习记忆损伤;拮抗脑组织和免疫器官萎缩;提高脑中ChAT活性,降低AChE活性;改善脑组织海马CA1区椎体细胞的数量和排列。结论毛蕊花糖苷能明显改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠的学习记忆能力障碍,可以调节脑组织ChAT和AchE活性,保护脑组织海马CA1区神经元细胞,提高脑组织和免疫器官指数,改善模型小鼠的脑损伤,提示毛蕊花糖苷的作用可能与其增强中枢胆碱能功能和保护神经元细胞有关。

1.4毛蕊花糖苷的临床应用

毛蕊花糖苷对体外培养新生大鼠颅骨成骨细胞(rat calvarial osteoblasts,ROB)增殖、分化作用的影响.方法 采用Ⅱ型胶原酶消化法分离制备新生大鼠颅骨ROB细胞,MTT法测定ROB细胞增殖,碱性磷酸酶(ALP)试剂盒法测定ROB细胞内ALP活性,以细胞的增殖率和ALP活性作为考察指标,观察不同浓度的毛蕊花糖苷对ROB细胞增殖和分化作用的影响.结果 110-7～110-9mol?L-1的毛蕊花糖苷对ROB细胞的增殖具有显著的促进作用(P＜0.05),且终浓度为110-7mol?L-1的毛蕊花糖苷在作用72h后能显著提高ROB细胞内碱性磷酸酶的活性(P＜0.05).结论 一定浓度的毛蕊花糖苷能显著的促进ROB细胞的增殖和分化. [4]

2毛蕊花糖苷含量测定的方法

2.1高效液相色谱

2.1.1高效液相法

高效液相色谱法（英语：high performance liquid chromatography，又称高效液相层析，简称HPLC）以前它有时候是指高压液相层析仪，是在生化和分析化学中常用的柱层析仪。[5]高效液相色谱法有三高一广一快的特点：

①高压：流动相为液体，流经色谱柱时，受到的阻力较大，为了能迅速通过色谱柱，必须对载液加高压。

②高效：分离效能高。可选择固定相和流动相以达到最佳分离效果，比工业精馏塔和气相色谱的分离效能高出许多倍。

③高灵敏度：紫外检测器可达0.01ng,进样量在μL数量级。

④应用范围广：百分之七十以上的有机化合物可用高效液相色谱分析，特别是高沸点、大分子、强极性、热稳定性差化合物的分离分析，显示出优势。

⑤分析速度快、载液流速快：较经典液体色谱法速度快得多，通常分析一个样品在15～30分钟，有些样品甚至在5分钟内即可完成，一般小于1小时。

此外高效液相色谱还有色谱柱可反复使用、样品不被破坏、易回收等优点，但也有缺点，与气相色谱相比各有所长，相互补充。高效液相色谱的缺点是有柱外效应。在从进样到检测器之间，除了柱子以外的任何死空间（进样器、柱接头、连接管和检测池等）中，如果流动相的流型有变化，被分离物质的任何扩散和滞留都会显著地导致色谱峰的加宽，柱效率降低。高效液相色谱检测器的灵敏度不及气相色谱。分为

1．吸附色谱(Adsorption Chromatography)

2．分配色谱(Partition Chromatography)

3．离子色谱(Ion Chromatography)

4．体积排阻色谱(Size Exclusion Chromatography)

5．亲和色谱(Affinity Chromatography) [6]

2.1.2液相色谱的使用方法

色谱柱的填料和流动相的组分应按各品种项下的规定.常用的色谱柱填料有硅胶和化学键合硅胶。后者以十八烷基硅烷键合硅胶最为常用辛基键合硅胶次之，氰基或氨基键合硅胶也有使用；离子交换填料用于离子交换色谱；凝胶或玻璃微球等，用于分子排阻色谱等。注样量一般为数微升。除另有规定外，柱温为室温，检测器为紫外吸收检测器。

在用紫外吸收检测器时，所用流动相应符合紫外分光光度法项下对溶剂的要求。

正文中各品种项下规定的条件除固定相种类、流动相组分、检测器类型不得任意改变外，其余如色谱柱内径、长度、固定相牌号、载体粒度、流动相流速、混合流动相各组分的比例、柱温、进样量、检测器的灵敏度等，均可适当改变

以适应具体品种并达到系统适用性试验的要求。一般色谱图约于20分钟内记录完毕。2.系统适用性试验

按各品种项下要求对仪器进行适用性试验，即用规定的对照品对仪器进行试验和调整，应达到规定的要求；或规定分析状态下色谱柱的最小理论板数、分离度和拖尾因子.

2.2毛蕊花糖苷的检测方法

2.2.1测定灵杞黄斑颗粒中毛蕊花糖苷和丹酚酸B含量的方法。

方法采用Agilent Eclipse XDB-C18(250mm4.6mm,5μm)色谱柱,流动相:乙腈(A)-0.1%磷酸水溶液(B)进行梯度洗脱,梯度洗脱程序为进样0～8min,调节流动相A∶B(20∶80,V/V);8～20min,流动相A∶B(30∶70,V/V);20～23min,流动相A∶B(20∶80,V/V);流速:1.0mLmin-1,检测波长:334nm,柱温:30℃,进样量:10μL。结果毛蕊花糖苷和丹酚酸B分别在1.50～14.97mgL-1和18.92～189.23mgL-1范围内与峰面积呈良好的线性关系,相关系数分别为0.9998和0.9999,平均加样回收率毛蕊花糖苷为(99.7s1.1)%,RSD=1.12%,丹酚酸B为(99.51.0)%,RSD=1.02%,3批样品中毛蕊花糖苷平均含量均不低于36.9μgg-1,RSD均不大于1.54%,丹酚酸B平均含量均不低于344μgg-1,RSD均不大于1.94%。结论该方法简便、快速、准确、灵敏度高、专属性强,可用于灵杞黄斑颗粒剂的质量控制。[7]

2.2.2测定车前子中毛蕊花糖苷的方法

方法:色谱柱:Spherigel C_(18)柱(150mm4.6mm,5μm),流动相:乙腈-甲醇-1%醋酸溶液(10:15:75),流速:1mlmin~(-1),检测波长:254nm,柱温:30℃。结果:毛蕊花糖苷在0.1936～3.0976μg范围内线性关系良好,r=0.999 8;平均回收率为99.9%,RSD为1.80%(n=6)。结论:市售车前子中毛蕊花糖苷含量差异较大[8]

2.2.3测定兰州肉苁蓉中毛蕊花糖苷的含量测定方法

方法采用ZORBAX-SB C18色谱柱,乙腈-0.1%磷酸溶液(23∶77)为流动相;检测波长为334nm;柱温为30℃。结果毛蕊花糖苷在10.06～402.40μg.mL-1范围内与峰面积呈良好线性关系(r=0.9999),平均回收率为97.52%,RSD为2.58%(n=9)。结论本方法简便、重现性良好,结果准确可靠。[9]

2.2.4测定生地黄和熟地黄中毛蕊花糖苷及异毛蕊花糖苷的含量测定方法。

方法:采用Agilent TC-C18色谱柱,柱温30℃;流动相为甲醇(A)-0.1%甲酸(B),梯度洗脱(0 min,30%A;30 min,40%A;45 min,45%A;60 min,55%A),流速1 mL/min;检测波长330 nm。比较生地黄不同炮制时间(0 h,8 h,16 h,32 h)的特征图谱,测定地黄饮片中毛蕊花糖苷和异毛蕊花糖苷的含量。结果:毛蕊花糖苷含量随炮制时间的增加而降低,异毛蕊花糖苷含量随炮制时间增加而增加。生地黄中毛蕊花糖苷平均含量高于熟地黄,异毛蕊花糖苷平均含量低于熟地黄。结论:生地黄中毛蕊花糖苷在炮制过程中可能部分转化为异毛蕊花糖苷,将熟地黄中的异毛蕊花糖苷和毛蕊花糖苷共同作为评价熟地黄质量的指标更加合理。[10]

2.2.5测定小野芝麻中毛蕊花糖苷的含量。

方法 :采用高效液相色谱法 ,KromasilC18色谱柱 (4.6mm 15 0mm ,5 μm) ,流动相乙腈 水 冰醋酸 (13∶86∶1) ,检测波长 35 0nm。 结果 :测得平均回收率为 97.0 % ,RSD为1.6 9%。结论 :方法准确可靠 ,适合于小野芝麻中毛蕊花糖苷的含量测定。[11]

2.2.6测定蜜桶花颗粒中毛蕊花糖苷的含量。

方法采用高效液相色谱法,色谱柱为Agilent ZORBAX-Extend C18(4.6mm150mm,5μm),流动相:乙腈-1%冰醋酸(13∶87),流速:1.0mL/min,检测波长:334nm,柱温:30℃。结果毛蕊花糖苷线性浓度范围在0.0628～1.2560μg,r=0.99983,平均回收率为99.61%,RSD=1.55%(n=6)。结论该方法简单准确,重复性好,可作为蜜桶花颗粒的质量控制方法。[12]

2.2.7测定裸花紫珠制剂中毛蕊花糖苷含量的反相高效液相色谱法。

方法采用反相高效液相色谱法,色谱柱为Shimadzu vp-ods(4.6 mm250 mm,5μm),流动相为乙腈-0.5%磷酸溶液(18∶82),流速1.0 mL.min-1,检测波长332 nm,柱温35℃。结果毛蕊花糖苷线性范围为0.1～0.9μg,r=0.999 8(n=5),裸花紫珠分散片中毛蕊花糖苷平均加样回收率98.68%(RSD=1.97%),裸花紫珠片中毛蕊花糖苷平均加样回收率99.43%(RSD=1.95%),裸花紫珠胶囊中毛蕊花糖苷平均加样回收率100.09%(RSD=1.60%)。结论所建立的方法专属性强,可为科学评价裸花紫珠制剂的质量提供新的理论依据。[13]

3.总结

HPLC法测量毛蕊花糖苷，方法快速，简单，准确 ，重复性好，结果可靠，灵敏度高、专属性强,以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂，以乙腈0.1%醋酸溶液（16：84）为流动相；检测波长为334.理论塔板数按毛蕊花糖苷峰计算应不低于5000

4.参考文献

[1] 王国强《全国中草药汇编（第3版）》人民卫生出版社 2014年最新版

[2] 边宝林 王宏洁 杨健《中国中药杂志》 2010年06期

[3] 高莉 彭晓明 霍仕霞 林娟 闫明 张富春 毛蕊花糖苷改善D-半乳糖致亚急性衰老小鼠脑损伤的作用《中草药》 2014年01期

[4] 海峡药学毛蕊花糖苷对新生大鼠体外培养成骨细胞增殖与分化作用研究2012年4期

[5] 田丹碧.《仪器分析》.化学工业出版社

[6] 刘志广.《仪器分析》.高等教育出版社

[7] 姚慧娟 胡道德 金剑 刘皋林 高效液相梯度洗脱法测定灵杞黄斑颗粒中毛蕊花糖苷和丹酚酸B含量《中国新药与临床杂志》 2010年02期

[8] 王隶书 王友联 李明洋 宋柏林 刘永宏 HPLC测定市售车前子中毛蕊花糖苷的含量《中国药师》 2011年11期

[9]　 张贵财 朱旭江 杜兴 任淑玲 贺军权 刘霞 . HPLC法测定兰州肉苁蓉中毛蕊花糖苷的含量《中国药事》 2010年08期

[10] 尚伟庆 贺清辉 张建军地黄炮制过程中毛蕊花糖苷变化的研究《新中医》 2014年05期

[11] 蒋受军 朱斌 林瑞超 张尊建 . 反相高效液相色谱法测定小野芝麻中毛蕊花糖苷的含量《中国中药杂志》 2002年04期

[12] 尹明 牟娟 肖华芬 董丽荣 李宗顺 HPLC法测定蜜桶花颗粒中毛蕊花糖苷的含量《中药新药与临床药理》 2008年06期

[13]莫迎;;裸花紫珠制剂中毛蕊花糖苷含量测定[J];医药导报;2012年02期

本课题要研究或解决的问题和拟采用的研究手段（途径）：

1． 用高效液相方法测定益经颗粒中毛蕊花糖苷的含量

样品与对照品的配制

测定样品的线性关系、稳定性、精密度、重复性、回收率和含量

2．研究方法 ---- 高效液相色谱法

仪器：岛津LC-15C高效液相色谱仪、SPD-15C检测器

检测方法： Kromasil 100-5C₁₈ （250*4.6mm）

流动相：以乙腈0.1%醋酸溶液（16:84）为流动项

检测波长：334nm。

外标法以峰面积计算

指导教师意见：

1．对文献综述的评语：

2．对本课题的深度、广度及工作量的意见和对设计（论文）结果的预测：

指导教师：

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负责人：

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