1. 研究目的与意义
炎症反应是一种常见的病理过程，可发生在身体不同的组织和器官。导致炎症反应的因素有很多，包括生物因素、物理因素、药物因素、化学因素等。炎症反应发生机理比较复杂，当致病因子作用机体后，组织细胞会受到损坏，使得局部组织变质、渗出和增生等。炎症较严重时，由于病原微生物及其毒素的作用，以及局部血液循环障碍、发热等因素的影响，心、肝、肾等器官的实质细胞可发生不同程度的变性、坏死和器官功能障碍，同时炎症反应是一些疾病的发病基础，由此对炎症的研究有重大意义。
小麦胚芽是小麦籽粒的生命源泉,含有极其丰富且优质的蛋白质、脂肪、多种维生素及一些微量生理活性成分,被营养学家们誉为“人类天然的营养宝库”。小麦胚芽中含有多种生物活性物质，包括胡萝卜素、生育酚、黄酮类化合物和多不饱和脂肪酸，具有较强的抗炎作用。已经有研究表明小麦胚芽产品及相关衍生物在治疗炎症疾病方面具有积极作用。我们将研究小麦胚芽多肽对LPS诱导的巨噬细胞的验证模型进行抗炎研究，为研究抗炎疾病药物做出理论依据。
2. 研究内容和预期目标
| 1 细胞培养 Raw264.7细胞在含10%（v/v）胎牛血清（FBS，Gibco）和1%抗生素（100U/mL青霉素和100 g/mL链霉素）的RPMI培养基1640（RPMI培养基1640，Solarbio）中37℃和5%CO2的环境中培养。 2细胞毒性试验 收集Raw264.7细胞，置于5104个细胞/mL的细胞悬液中。将100μL细胞接种于96孔板的每个孔中，在允许细胞粘附于板上的CO2培养箱中培养12小时，然后用不同浓度（0、5、20、80μM）的水蛭素处理。细胞进一步培养24小时后，每孔加入10μL5mg/mL MTT溶液。再孵育4h，提取MTT溶液和培养基，加入50μLDMSO，在37℃恒温器中摇晃20分钟。 3 Griessassay 基于Kim等人的方法在LPS（1μg/mL）刺激或不刺激的条件下进行Griess试验，连续24小时，向细胞培养基中加入50μL细胞给药液，然后依次加入50μLGriessⅠ和GriessⅡ溶液,混匀,在490nm波长下，用微板阅读器测量吸光度。 4蛋白印迹法 细胞在37℃5% CO2条件下用YDWPGGRN刺激24小时，通过溶化收集，压碎，12000g离心15分钟。用BCA蛋白分析法测定裂解液中的总细胞蛋白。细胞裂解产物经SDS-PAGE凝胶分离。用封闭液（5%脱脂乳）在室温下封闭4h，将原代抗体稀释于3%牛血清白蛋白（BSA）中，用膜在4℃孵育过夜。根据制造商的说明，用热ECL试剂检测蛋白质。 |
3. 国内外研究现状
现国内有通过脂多糖（LPS）干预巨噬细胞建立炎症细胞模型，对提取小麦麦胚球蛋白的体外抗炎活性进行了探究。通过体外细胞培养研究了小麦麦胚球蛋白对RAW264.7细胞的细胞毒性；利用Griess法研究了小麦麦胚球蛋白对RAW264.7细胞经LPS诱导前后NO产生量的影响；利用ELISA法检测实验组对炎症细胞模型中细胞因子TNF—α含量的影响。实验研究显示麦胚球蛋白有显著的抗炎作用，各质量浓度麦胚球蛋白对RAW264.7细胞无毒性，能够显著促进正常 RAW264.7的NO产生量；各质量浓度麦胚球蛋白均能显著抑制LPS诱导的RAW264.7细胞NO的产生，且随着质量浓度的升高抑制效应愈加显著；对促炎因子TNF-α有明显的抑制作用，说明麦胚球蛋白在与促炎因子相关的炎症疾病中起到一定的抗击炎症的作用。
国外实验研究用柠檬酸来加工小麦胚芽，柠檬酸是一种用于食品的强酸，并对柠檬酸处理的小麦胚芽提取物（CWG）的抗炎作用进行了评价，未经处理的小麦胚芽提取物（UWG）使用脂多糖（LPS）刺激的巨噬细胞，证实柠檬酸治疗提高了小麦胚芽提取物的抗炎活性。以及最近发现发酵是唯一用来改善小麦功能的加工方法,酿酒酵母发酵的小麦胚芽提取物具有抗关节炎、抗癌的作用以及免疫刺激作用。
4. 计划与进度安排
2022年11月1日-2022年11月10日：参考相关文献，确定实验题目。 2022年11月15日-2022年11月30日：完成论文开题报告。
2022年12月1日-2022年12月10日：熟悉并熟练细胞实验操作，构建炎症模型。 2022年12月10日-2022年12月30日：完成多肽对巨噬细胞炎症模型炎症因子分泌的影响。 2022年1月3日-2022年1月16日：完成多肽对巨噬细胞炎症模型no分泌的影响。 2022年2月20日-2022年3月10日：完成多肽对巨噬细胞抗炎蛋白水平表达的影响。
2022年3月15日-2022年4月15日：撰写论文。
5. 参考文献
[1]毕振原, 黄继红, 刘娜, 等. 麦胚球蛋白的体外抗炎活性研究[j]. 河南工业大学学报: 自然科学版, 2017(38): 68.
[2]吴素萍. 小麦胚芽中生物活性物质的研究现状[j]. 食品工业科技, 2009(01): 342-345.
[3]pastar,irena, stojadinovic, olivera, yin, natalie c,等. epithelializationin wound healing: a comprehensive review[j]. advances in wound care,3(7):445-464.
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