屎肠球菌对单增李斯特菌粘附体外肠细胞模型的拮抗作用开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1 单增李斯特菌单核细胞增生性李斯特菌（listeria monocytogenes，以下简称单增李斯特菌）是一种人畜共患病的重要病原菌，世界卫生组织将其列为20世纪90年代四大食源性病原菌之一，在食品中具有较高的污染率。

研究表明单增李斯特菌主要存在与水分活度较高的食品中，如乳和乳制品、水产品、肉和肉制品中[1]。

对单增李斯特菌的侵染致病机理的研究以持续近30年，但很多方面仍不清楚。

2. 研究的基本内容和问题

该课题的主要研究目的是利用小鼠小肠上皮隐窝细胞系为体外细胞模型，研究乳酸菌对单核细胞增生性李斯特菌在肠道内定植和侵入的拮抗作用。

旨在利用隐窝细胞系的生理特点，为研究肠道微生物建立新的体外实验方法。

通过对细菌的荧光染色和粘附实验观察在有无乳酸菌共同作用的条件下单增李斯特菌对肠道隐窝细胞系的粘附和侵染，及细胞系的形态结构变化。

3. 研究的方法与方案

4. 研究创新点

对肠道微生物间的拮抗作用研究多使用贴壁细胞模型，本研究采用在特殊基质胶中培养获得的、具有三维立体结构和一定组织结构的肠道隐窝细胞系。

该细胞系更贴近真实的肠道微环境，并有利于研究单增李斯特菌侵染对肠道内壁结构的影响。

对细菌进行荧光标记后可直接观察细菌在细胞系表面和内部的分布情况，较传统细胞模型更有优势。

5. 研究计划与进展

10.25-11.15 查阅文献、了解实验涉及细胞系、单增李斯特菌和屎肠球菌的特点，了解粘附实验的原理和步骤，撰写文献综述。

11.16-12.20 熟悉实验室情况，学习并熟悉粘附实验的操作步骤；到动物医学院处学习肠道隐窝细胞系的分离培养，进一步了解熟悉该细胞模型培养时的条件特点和注意事项。

12.21-3.31 进行单增李斯特菌对肠道隐窝细胞系的粘附、侵染及荧光标记观察的预实验，建立适宜的实验方法和条件。