褐藻胶裂解酶结构域的截断表达及性质研究开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述包含参考文献）

1.1研究背景褐藻胶（alginate）是一种由巨藻、海带和马尾藻等褐藻中提取而得的高聚合度的酸性多糖，是细胞壁的主要组成物质[1]。

褐藻胶是由β-d-聚甘露糖醛酸（m）和α-l-聚古罗糖醛酸（g）通过1→4糖苷键连接而成的直链多糖[2]。

目前，褐藻胶被广泛应用在食品、医药、日用化工和农业等领域[3]，然而仍存在一些不足：分子量较大，分子质量范围一般在104~106 u，凝胶性强，黏度大，不易被机体吸收等，使其进一步的应用受到限制[4]。

2. 研究的基本内容、问题解决措施及方案

2.1研究内容截取褐藻胶裂解酶alypl17的n端在大肠杆菌内进行重组表达，通过与alypl17全酶的比较，探究alypl17的n端的酶学性质，产物分布相较于全酶的区别。

主要涉及：利用pcr技术扩增，alypl17n基因全长序列，利用蛋白纯化系统对表达后的alypl17n进行纯化，利用sds-page电泳检测alypl17n端的纯化情况，利用紫外吸收法对纯化后的alypl17n进行初步鉴定,使用dns法测定alypl17n的酶学性质。

2.2研究手段2.2.1对褐藻胶裂解酶alypl17n端结构域进行重组表达载体构建以及相应表达纯化将alypl17n端的基因克隆转化到大肠杆菌表达载体上，获得可异源表达的大肠杆菌重组菌株，用该菌株异源表达相应的褐藻胶裂解酶。