拟南芥HOPS复合体亚基突变体vps11表型的初步鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1本课题的意义 液泡是细胞内由液泡膜包被的充满液体的泡状结构，是大多数植物细胞最显眼的细胞器。

植物液泡的功能包括：1、可作为离子和代谢物的贮藏库，为细胞解毒和稳定细胞内环境；2、参与细胞对环境及生物因素的应答反应；3、在植物的营养器官里，它们和细胞壁共同作用产生膨压，为细胞生长提供驱动力；4、在种子和其他特殊的贮藏组织中，它们可以贮藏蛋白质和可溶性碳水化合物，参与植物细胞对环境和生物因素的应答反应等。

因此，研究液泡形成的分子机制对于了解植物生长发育，适应环境的机理有着重要作用。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题研究目标：鉴定拟南芥hops复合体的3个亚基（vps11，vps33和vps41）基因的t-dna插入以及rnai突变体的的表型，以此初步了解三个亚基的生理功能。

研究内容： 1、购买拟南芥hops复合体的3个亚基基因vps11，vps33和vps41的t-dna插入突变体并进行鉴定。

2、构建vps11，vps33和vps41的rnai干扰突变体。

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析研究方法：1. 通过pcr方法鉴定t-dna插入突变体；2. 通过遗传分析的方法初步确定配子体发育情况；3. 通过染色和固定的方法初步观察配子体和胚胎发育的表型；4. 通过构建rnai克隆转化植株的方法，构建诱导表达的rnai植株，并观察表型。

技术路线：（见附件）可行性分析：国内外已有研究发现hops复合体的一些成员参与了细胞自噬过程以及液泡融合过程，为hops复合体功能的进一步研究提供了线索。

实验设计方案科学，可操作性强。

4. 研究创新点

本研究是第一次研究HOPS复合体亚基VPS11和VPS33的基因缺失突变体的表型，也是第一次构建VPS11、VPS33和VPS41的RNAi突变体，对于系统深入了解植物HOPS复合体的生理功能和细胞学功能具有创新价值。

5. 研究计划与进展

1.2016.11 ~ 2016.12 鉴定vps11、vps33和vps41基因的t-dna插入突变体，以及构建vps11、vps33和vps41的诱导rnai突变体。

2.2017.2 ~ 2017.3遗传分析观察配子体的发育情况；观察配子体和胚胎发育的表型。

3.2017.3 ~ 2017.4诱导vps11、vps33和vps41基因沉默，并观察其表型；通过和一些marker杂交，观察其细胞内液泡以及pvc和自噬囊泡的变化。