灵芝bHLH型转录因子GL30684对灵芝酸生物合成的调控研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1 本课题研究意义 灵芝[ganoderma lucidum (curtis: fr.) karst]隶属于真菌门（eumycota）、担子菌亚门（basidiomycotina）、层担子菌纲（hymenomycetes）、无隔担子菌亚纲（holobasidiomycetidae）、非褶菌目（aphyllophorales）、灵芝菌科（ganodermataceae）、灵芝属（ganoderma）[1]。

灵芝又别称瑞芝、仙草，是一种药食两用真菌[2]。

我国最早的药物专著《神农本草经》将灵芝列为上品，可以使人轻身不老。

2. 研究的基本内容和问题

1、 研究目标通过研究沉默bhlh型转录因子gl30684后，灵芝酸等次生代谢产物含量以及ros（活性氧）等指标发生变化，探讨灵芝bhlh型转录因子gl30684与灵芝酸合成的关系。

同时，研究茉莉酸甲酯（meja）处理下灵芝酸合成的变化，进一步研究灵芝bhlh型转录因子gl30684对灵芝酸生物合成的调控作用。

2、 研究内容2.1沉默bhlh型转录因子gl30684后，转化子（缺陷性）和野生型合成灵芝酸含量的改变；2.2沉默bhlh型转录因子gl30684后，转化子（缺陷性）和野生型灵芝菌丝ros（活性氧）含量的改变；2.3比较meja处理前后，野生型灵芝中合成灵芝酸含量的变化，以及相对应转化子（缺陷性）灵芝中合成灵芝酸含量的变化； 2.4比较meja处理前后，野生型灵芝菌丝中ros的含量变化，以及相对应转化子中ros的含量变化；2.5纵向比较meja处理前后，wt、ck1、ck2、以及bhlh型转录因子30684沉默的两个转化子30684-5和30684-7的菌丝三萜含量，分析比较meja对灵芝酸生物合成的调控作用；3、 拟解决的关键问题灵芝bhlh型转录因子gl30684对灵芝酸生物合成的调控作用。

3. 研究的方法与方案

1、 研究方法1.1 确定沉默bhlh型转录因子gl30684后，转化子（缺陷型）和野生型合成灵芝酸含量改变的方法。

1.1.1 分别接种野生型和bhlh型转录因子gl30684沉默的转化子于pda固体培养基中，培养57天；1.1.2 分别转接至pda液体培养基中，培养7天后打种，并转接到pda液体培养基中进行发酵；1.1.3 发酵7天后，利用分光光度计测定灵芝酸的含量。

1.2 确定沉默bhlh型转录因子gl30684后，转化子（缺陷型）和野生型灵芝菌丝ros（活性氧）含量的改变。

4. 研究创新点

bHLH型转录因子在动植物中的研究及分类已经相对成熟，但是其在真菌中的研究几乎没有，因此探究灵芝bHLH型转录因子对灵芝酸合成代谢的调控作用研究转录因子在真菌次级代谢中的调控作用提供了新的思路和方法。

5. 研究计划与进展

、研究计划1) 2016.09-2016.10 查阅资料，整理实验思路，学习基本方法。

2) 2016.10-2016.11进行预实验，初步研究转化子和野生型生长差异和三萜含量的差异，分析结果，总结经验。

3) 2016.11-2017.03 添加处理，对处理前后的菌丝进行发酵，测定三萜含量。