杂草稻Rc基因的CRISPR-Cas9遗传转化体系的研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题的意义、国内外研究进展、应用前景等（列出主要参考文献）一、课题意义杂草稻作为恶性杂草，严重危害着水稻的产量和品质，现已成为全世界大部分水稻种植区内仅次于稗草及千金子的第三大恶性杂草。

美国每年由于杂草稻造成经济损失约500万美金，而在斯里兰卡，杂草稻已导致水稻减产超过40。

在我国于90年代初开始陆续报导杂草稻的生产危害，至2011年全国杂草稻危害面积超过333.33万hm2。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题一、研究目标在杂草稻中成功构建由农杆菌介导的遗传转化体系，利用crispr/cas9系统敲除杂草稻的rc基因，获得敲除rc基因的杂草稻植株。

二、研究内容用杂草稻162和栽培稻557（对照）的种子培养愈伤组织，用转化cas9质粒的农杆菌侵染愈伤组织后经过四次筛选得到rc基因敲除的杂草稻植株。

三、拟解决的关键问题1、愈伤组织的培养；2、农杆菌遗传转化的效率；

3. 研究的方法与方案

研究方法、技术路线、实验方案及可行性分析一、研究方法1、愈伤组织的培养；2、农杆菌侵染愈伤组织；3、筛选与再生。

二、技术路线见附件三、实验方案1.种子脱壳。

2.种子消毒：（1）75乙醇漂洗一次，再用无菌水漂洗3次； （2）用30花王漂白水浸泡种子，摇晃30-40min。

4. 研究创新点

特色或创新之处构建杂草稻中构建遗传转化体系，并且结合CRISPR/Cas9技术，有利于研究杂草稻的Rc基因的功能。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展1、2017年8月-10月愈伤组织的培养与继代2、2017年10月-11月农杆菌侵染愈伤组织3、2017年11月-12月第一次筛选4、2017年12月-2018年1月第二次、第三次筛选以及第二批愈伤组织的培养5、2018年2月第四次筛选6、2018年3月农杆菌侵染第二批愈伤组织，第二批愈伤组织的第一次以及第二次筛选7、2018年4月第二批愈伤组织的第三次以及第四次筛选8、2018年5月毕业论文的撰写