四氢叶酸依赖型麦草畏脱甲基酶Dmt50酶学特性研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

一、研究意义麦草畏（3,6-二氯-2-甲氧基苯甲酸）是一种合成植物生长素选择性除草剂。

该除草剂能有效防治200多种一年生或二年生杂草，阔叶杂草和木本植物，对禾本科作物比较安全[1-4]。

由于麦草畏成本低，效率高，杂草控制谱广，主要用于麦田，玉米田和谷类作物田间防除杂草。

2. 研究的基本内容和问题

一、研究目标及内容本项目研究目标主要是：进一步研究在菌株ndbn-20中鉴定出的能够催化麦草畏去甲基化的thf依赖性甲基转移酶dmt50的催化反应和特征，并将dmt50基因转入拟南芥中评估其应用潜力。

本项目的研究内容主要是：（1）thf依赖性甲基转移酶dmt50的表达载体构建。

（2）thf依赖性甲基转移酶dmt50的表达纯化。

3. 研究的方法与方案

一、技术路线 二、研究方法1.脱甲基酶dmt50表达载体的构建按照图1所示过程构建脱甲基酶的表达载体，我们选择以菌株ndbn-20的基因组dna为模板，使用pcr扩增技术扩增dmt50，得到带有同源臂的dmt50 pcr产物。

同时，用nde i和xho i核酸内切酶双酶切pet29a ( )载体并利用凝胶回收试剂盒纯化、回收后，用同源重组试剂盒与pcr片段进行连接，转化至表达宿主e. coli origami 2 (de3)中。

37c培养过夜，次日挑取阳性克隆进行测序。

4. 研究创新点

本项目的创新之处：深入研究麦草畏的降解基因和相关酶Dmt50，可为我国农业生物技术发展提供新的除草剂抗性/降解基因资源。

拥有了具有自主知识产权的抗除草剂基因(酶)资源，有利于我国抗除草剂转基因的育种和应用。

5. 研究计划与进展

（1）2017年11月初2018年2月初实验阶段。

构建dmt50基因表达载体。

dmt50酶的纯化表达。