约安巨马陆(Prospirobolus joannsi)丝氨酸蛋白酶抑制剂(Serpin-YM)原核表达及生物活性的初步测定开题报告

 2022-02-08 20:16:06

1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)

1本课题研究意义许多动物的皮肤组织中含有大量复杂多样的生物活性物质,特别是生物活性多肽,如蛋白酶抑制剂、抗菌肽、抗氧化肽以及凝集素等,具有极高的科研价值和利用价值[1]。

近年来用生物技术开发的多肽类、蛋白质生物大分子药物不断涌现,从蝎、蛇、蟾蜍等动物的皮肤分泌物中都找到了具有预防和抑制恶性肿瘤的多肽物质。

研究从马陆皮肤分泌物中得到的丝氨酸蛋白酶抑制剂,旨在从天然资源中寻找出选择性高、活性强、毒副作用小且使用面广的抗肿瘤新药[2]。

剩余内容已隐藏,您需要先支付后才能查看该篇文章全部内容!

2. 研究的基本内容和问题

4研究目标通过马陆转录组学分析,找到丝氨酸蛋白酶抑制剂基因,基因克隆得到相关基因片段,原核表达丝氨酸蛋白酶抑制剂,检测其活性并测定其对肿瘤细胞的作用。

5研究内容5.1得到丝氨酸蛋白酶抑制剂相关基因序列并构建表达载体从马陆毒腺中提取rna片段,通过反转录法得到其cdna文库。

根据已知丝氨酸蛋白酶抑制剂基因序列设计级联pcr引物,以得到的马陆毒腺cdna文库为模板,pcr扩增丝氨酸蛋白酶抑制剂基因片段并加入甲酸切割位点和酶切位点,连接到表达载体中,转入进感受态细胞,送生物公司测序。

剩余内容已隐藏,您需要先支付后才能查看该篇文章全部内容!

3. 研究的方法与方案

7研究方法1.构建马陆丝氨酸蛋白酶抑制剂表达载体2.原核表达并分离纯化目的蛋白3.对丝氨酸蛋白酶抑制剂进行活性检测8技术路线和实验方案提取马陆毒腺中的总rna → 反转录为cdna → pcr扩增目的基因片断 → 构建原核表达质粒 → 丝氨酸蛋白酶抑制剂的原核表达 → 蛋白纯化与验证 → 丝氨酸蛋白酶抑制剂的功能检测9可行性分析 项目指导教师在天然活性物质的开发与利用方面积累了丰富经验,实验技术方法成熟,已发表多篇相关文章。

本项目的研究计划已经划分,步骤详细切实可行,工作量适中,可以在一年内完成课题,并完成结题报告。

项目组依托南京农业大学生命科学学院动物生物化学实验室,具备本项目实施所需的各种实验技术方法及实验设备,实验条件成熟。

剩余内容已隐藏,您需要先支付后才能查看该篇文章全部内容!

4. 研究创新点

马陆毒液中含有和蜘蛛、蜈蚣、蝎子毒液类似的肽类毒素,有预防和抑制恶性肿瘤的活性,且对健康细胞和免疫系统没有毒副作用。

马陆相对于其他节肢动物,作为分解者,有着数量大,产毒量多,易于获取的优点。

但关于马陆的研究仍不完善,本实验以马陆丝氨酸蛋白酶抑制剂为研究对象,对其进一步做为药用奠定理论基础。

剩余内容已隐藏,您需要先支付后才能查看该篇文章全部内容!

5. 研究计划与进展

10研究计划2016年12月-2017年1月 原核表达载体构建 2017年3-4月 蛋白原核表达、分离和纯化 2017年5月 蛋白活性测定11预期进展(1)马陆cdna文库的构建 (2)经过基因克隆、原核表达及功能检测,得到一类高效的丝氨酸蛋白酶抑制剂。

(3)通过对该类丝氨酸蛋白酶抑制剂的结构与功能之间关系的研究,为相关的药物设计提供一定的参考。

(4)得到了一类高效特异的丝氨酸蛋白酶抑制剂,后期对其相关疾病的模型进行进行药物评价。

剩余内容已隐藏,您需要先支付 10元 才能查看该篇文章全部内容!立即支付

课题毕业论文、开题报告、任务书、外文翻译、程序设计、图纸设计等资料可联系客服协助查找。