GmCLC-c1和GmCLC-c2对大豆耐盐性的影响及生理机制开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1 课题研究意义及应用前景

盐胁迫是植物生长发育过程中经常遇到的威胁之一，土壤盐浓度过高会严重抑制作物的生长，降低农作物产量，严重时会导致农作物的死亡。在盐渍化土壤中，nacl是构成植物或作物盐害最主要的盐类，na 并不是植物的必需元素，高浓度的na 对于大部分植物都有毒害；高浓度的cl^-也会抑制一些植物的生长；近年来，有关研究证明阴离子毒害尤其是cl^-的毒害不可忽视(於丙军等，2017)。clcs是一类广泛分布于原核和真核生物细胞膜上介导以cl^-为代表的阴离子运输的重要通道以及转运蛋白家族，可驱动cl^-/h 的跨膜交换，同时也可转运no₃^-（barbier-brygoo et al，2011）。在大豆中，有研究报道称定位在液泡膜上的gmclc1，其转运cl^-依赖于胞质ph，而在拟南芥和大豆毛状根中过表达 gmclc1后发现，盐胁迫下植株地上部 cl^- 的浓度要显著低于对照，这说明盐胁迫下，该基因编码蛋白能够将吸收的cl^-积累于根部，从而减少其向地上部的转运(wonget al.2013;wei et al.2016)。gmclc-c1和gmclc-c2是调控大豆中两种重要电压门控氯离子通道的基因，因此具有重要的研究意义。本实验将通过发根农杆菌构建大豆发根组合植株，使目的基因在大豆根中干扰及过表达，并检测大豆发根组合植株在盐胁迫下的各项生理指标，旨在探寻这两种clcs在大豆耐盐过程中所发挥的功能。

2 国内外研究概况

2. 研究的基本内容和问题

3.1研究目标及内容

（1）通过基因克隆完成gmclc-c1与gmclc-c2干扰片段和过表达片段扩增。

（2）完成gmclc的rnai载体与过表达载体构建。

3. 研究的方法与方案

4 研究方法及手段

4.1干扰载体与过表达载体的构建及转化

将从gmclc-c1、gmclc-c2基因cds区选取的200bp左右片段，将其正义链及反义链连接到pfgc5941干扰载体上，测序成功后将重组质粒转入k599发根农杆菌中。

4. 研究创新点

gmclc-c1和gmclc-c2是大豆中与离子转运相关的基因。

目前关于阳离子转运通道的研究已经较为成熟，但我们对于阴离子通道仍知之甚少。

大豆作为世界主要农作物之一，阴离子通道的研究至关重要。

5. 研究计划与进展

2019年12月-2020年1月：干扰载体与过表达载体构建（已完成）；

2020年3月：载体鉴定与农杆菌转化（已完成）；