牛Mx1蛋白抑制猪瘟病毒增殖的初步研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

mx蛋白是由干扰素诱导表达或病毒感染时动物机体产生的一种抗病毒蛋白。mx 蛋白属于gtp 酶动态蛋白家族成员之一，具有广谱的抗病毒作用，并广泛存在于动物体内^[1]。mx蛋白是由i型干扰素（ifnα /β）或iii型干扰素诱导宿主细胞所产生的^[2]。

猪瘟(classical swine fever，csf)是由猪瘟病毒(csf virus，csfv)感染引起的猪的病毒性传染病，其典型症状与病理特征为高热、全身组织弥散性出血。本课题从牛源mx蛋白出发，为牛源mx蛋白对csfv的抑制作用的研究提供了理论与实验支撑，从而为抑制csfv 的研究做出了一个补充。

猪瘟病毒在分类学上属于黄病毒科(flavividae)的瘟病毒属(pestivirus)，与它同科的病毒还有人类丙型肝炎病毒(hepatitis c virus，hcv)，牛病毒性腹泻病毒(bovine viral dlarrhoeavirus，bvdv)和羊边界病病毒(borider disease virus，bdv)。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标：证明牛源mx1蛋白（bomx1）有抑制猪瘟病毒增殖的的作用，并且是通过作用csfv复制过程中的rna -多聚酶，ns5非结构蛋白来抑制其增殖的。

2.研究的内容

1.1通过间接免疫荧光实验（ifa）、免疫印迹实验（wb）鉴定bomx1基因已经成功连接上pcdna3.0载体，并且可以在pk-15细胞上成功表达。测定gtp酶活性来鉴定bomx1蛋白活性。

3. 研究的方法与方案

间接免疫荧光、免疫印迹实验证明pEGFP-Mx1的表达

测定GTP酶活证明boMx1的活性

荧光定量PCR、TCID₅₀实验证明Mx1抗猪瘟活性

荧光定量PCR证明Mx1抗猪瘟的浓度依赖性

运用激光共聚焦、免疫共沉淀技术鉴别boMx1与NS5B是否互作

4. 研究创新点

目前抗猪瘟的疫苗还不能做到百分之百的保护，所以要运用到抗病毒蛋白，干扰素本身就是一种抗病毒的蛋白质，Mx1是干扰素刺激机体产生的，目前还没有试验证明boMx1具有抗猪瘟病毒的文章，因此对boMx1抑制猪瘟病毒增殖进行初步研究。

5. 研究计划与进展

1.3月2号-3月20号

通过间接免疫荧光实验（ifa）、免疫印迹实验（wb）、测定gtp酶活性实验鉴定牛mx1基因已经成功连接上pcdna3.0载体，并表达出有gtp酶活性的bomx1蛋白。

2. 3月21号-4月10号