植物特有的RAB5同源基因在水稻抗盐中的机理研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1本课题研究意义目前，土壤盐渍化是影响作物质量和产量的主要环境因子之一，也是限制农业发展的主要因素之一。

植物对盐胁迫的抗性是一个受多基因、多途径调控的非常复杂的网络，研究植物耐盐性的分子机制有助于通过分子手段改良和创造出耐盐植物新品种，从根本上增强植物对盐胁迫的适应能力，并对植物在盐碱化土地上扩大栽培有重大意义。

而囊泡运输是真核生物物质运输和信息交流的主要方式。

2. 研究的基本内容和问题

4研究目标 rab5蛋白是囊泡运输过程中重要的调节因子，参与靶向质膜或液泡膜的囊泡运输途径；并且rab5b/dca过表达株系具有抗盐特性。

由于人们对水稻耐盐分子机理的了解还不是非常透彻，通过本实验，初步确定参与囊泡运输的rab5小g蛋白在转基因植株中的耐盐机理，为该领域今后进一步的研究奠定基础。

5研究内容5.1对野生型拟南芥和rab5b/dca过表达植株进行盐处理，测定其地下及地上部分na 、k 的含量，大致确定na 的运输方向。

3. 研究的方法与方案

7研究方法7.1野生型（wt）和rab5b/dca过表达植株地上及地下部分na 、k 含量测定将在ms培养基上生长4天的wt和rab5b/dca过表达的拟南芥幼苗，转移到含有100 mm nacl的ms培养基上生长12天，然后用100 mm cacl2溶液洗去琼脂，将根和叶在轴根处分开，分别放入55℃烘箱中烘干（4天左右）。

将地上部分称取0.1g，地下部分称取0.01g进行硝煮（每种材料的地下或地上部分至少需要三个样品），之后用原子火焰分光光度计分别测定野生型和rab5bca过表达植株地上及地下部分na 、k 的含量。

7.2明确rab5b/dca过表达植株在细胞水平上耐盐机制将在ms培养基上生长4天的野生型和rab5b/dca过表达拟南芥幼苗，转移到含有100 mm nacl的ms培养基上生长12天后，取植株的根进行na 、ca2 以及ros的染色。

4. 研究创新点

11特色或创新之处盐胁迫是最重要的非生物胁迫之一，囊泡运输途径是最基础的生物学途径，但两者之间的关系尚不明确。

本研究初步探讨了囊泡运输途径中重要的调节因子RAB5小G蛋白在耐盐中的功能，有助于拓宽我们对植物耐盐途径的认识。

5. 研究计划与进展

12研究计划及预期进展2016.10-2017.01：构建载体和拟南芥转基因；并对拟南芥野生型和rab5b/dca过表达植株进行盐处理，测定其地下及地上部分na 、k 的含量，大致确定na 、k 在植物内的运输方向。

2017.02-2017.05：将rab5b/dca过表达植株与marker line进行杂交并对其后代进行筛选，明确rab5b/dca过表达对这些蛋白定位的影响；同时，对拟南芥野生型与耐盐株系进行na 、ca2 以及ros的染色，确定na 、ca2 以及ros的定位，明确rab5b/dca过表达植株在细胞水平上的耐盐机制。

2017.05-2017.06：完成实验数据的整理并撰写论文。