蛾蝇抗菌肽attacin的原核表达及功能鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

本课题的意义、国内外研究概况、应用前景等（列出主要参考文献）1本课题研究意义 昆虫抗菌肽是一种分子量小、热稳定性强、水溶性好、无免疫原性、强碱性、抗菌谱广的新型抗菌药物，对细菌、真菌、病毒、原虫及癌细胞都有着明显的杀伤作用。

与抗生素对比，抗菌肽的作用机制更优秀，不易引起微生物的耐药性，绝大多数不损害或破坏高等动物的正常细胞。

昆虫抗菌肽所具有的以上优点及丰富的资源含量使其成为开发新型抗微生物药物优秀的模板，因此对抗菌肽的研究将有可能解决目前抗生素耐药性的问题。

2. 研究的基本内容和问题

1研究目标对蛾蝇抗菌肽attacin进行原核表达和功能鉴定 2 研究内容2.1蛾蝇cdna的合成利用trizol法提取蛾蝇总rna，并通过微量分光光度计及核酸凝胶电泳测定提取总rna的质量和浓度。

对所获得的rna通过smart方法进行逆转录，再通过该抗菌肽已知序列设计引物，扩增得到该多肽的全长cdna序列。

2.2蛾蝇抗菌肽attacin的克隆结合pet-32a（ ）质粒序列和甲酸识别位点序列设计引物，得到原核表达的目的片段。

3. 研究的方法与方案

1研究方法1.1 蛾蝇抗菌肽attacin的原核表达1.1.1蛾蝇总rna的提取将活体蛾蝇（6-10只）放入事先用液氮冷却好的研钵中充分研磨。

将所得粉末转移到两个1.5ml ep管中，向每个ep管各加1ml trizol试剂，之后立即冰上放置5分钟使组织细胞充分裂解，每2分钟颠倒摇匀一次。

加入0.2ml氯仿，30s的上下剧烈震荡，在冰上放置3分钟，14000rpm，4℃离心15分钟。

4. 研究创新点

特色或创新之处国内外目前没有对蛾蝇抗菌肽的相关研究报道。

本课题为抗菌肽的研究提供了新的研究方向和材料，同时完善了对蛾蝇生理生化性能的探索。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2017年1月-2月：完成蛾蝇抗菌肽attacin全长cDNA的获得；2017年3月：完成该抗菌肽基因克隆载体及表达载体的构建；对克隆载体进行鉴定及后续工作。

2017年4月：进行抗菌肽的抑菌活性鉴定工作。