稻瘟病菌突变体库构建及受麝香酶VOCs抑制相关基因鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.研究目的及意义水稻三大病害之一的稻瘟病(pyricularia oryzae)是由稻瘟病菌子囊菌[magnaporthe grisea(hebert)barr.(无性态 pyricularia grisea sacc.)]真菌性病害引起的，是一种世界性病害。

该病遍及各大稻区,在我国气候较温和的沿江、沿海地区和日照少、雾露时间长的山区发生较为严重,在稻瘟病的流行年份可造成 10%~20%的经济损失，因为稻瘟病菌个体小、品种多、繁殖时间短且易受地理和气候的影响，预防治理起来较为困难，稻瘟病严重影响着水稻的生产,因而研究水稻稻瘟病病菌十分必须。

何秋月(2000)实验结果表明，稻瘟病菌突变频率高,稻瘟病菌的致病力容易发生改变。

2. 研究的基本内容和问题

1.研究的目标、内容实验中用农杆菌介导的转化方法（atmt)得到转化子,构建稻瘟病菌突变体库，筛选出不受麝香霉菌vocs抑制的突变体，通过hi-tail pcr获得插入位点的侧翼序列，并进行基因测序，与稻瘟病菌基因进行对比，即可找出可能的vocs作用靶基因，有助于阐明vocs抑制病原菌的机制并为下一步的靶基因的功能研究打下基础。

主要研究方法是使用t-dna随机插入的方法构建突变体库，利用hi-tail-pcr的方法来获得随机插入位点的侧翼序列，通过测序获得序列信息，并与麝香霉基因组比对，得到目标基因。

2.拟解决的问题(1)获得抗vocs抑制的稻瘟病菌随机插入突变体(2)鉴定vocs抑制作用在稻瘟病菌中的靶基因

3. 研究的方法与方案

试验设计1.试验材料1.1菌株和载体稻瘟病菌guy11，麝香霉菌zjlq024，农杆菌agl-1，质粒载体pkd6-gfp1.2培养基的配制pda培养基(1000ml):马铃蓄200g，葡萄糖20g，琼脂粉20g，用蒸馏水定容至1000ml.lb培养基(1000ml):胰蛋白胨2g，酵母提取物1g，酪氨酸1g，葡萄糖10g，琼脂粉20g，硝酸盐，用1mol/l naoh调阳至6.5，蒸馏水定容至1000ml。

2.实验方案2.1农杆菌感受态细胞的制备(1)取-80℃保藏的农杆菌菌株于室温待其部分融化，处于冰水混合状态插入冰中。

(2)无菌状态下，将质粒加入感受态细胞悬液中，缓慢摇匀，冰水浴静置5min.(3)将离心管置于液氮中5min。

4. 研究创新点

研究找出VOCs抑制作用在稻瘟病菌中的靶基因，对研究VOCs作用机制提供依据，且促进稻瘟病菌的生物防治具有重要意义。

5. 研究计划与进展

1.研究计划：起止时间 工作内容 阶段成果2017.9-2017.11 查阅相关文献，课题的资料收集与整理，确定研究初步方案文献综述；在实验室进行菌株培养；进一步完善实验设计思路；开题报告2017.12-2018.4 进行试验，重复实验得到并筛选转化子，转化子测序找出VOCs靶基因，并整理实验数据； 试验记录2018.5撰写毕业论文，准备答辩 毕业论文2.预期结果：得到抗麝香霉菌VOCs抑制的稻瘟病菌随机插入突变体鉴定出VOCs抑制作用在稻瘟病菌上的潜在靶基因