嗜甲基菌5GB1C中CheY类蛋白对铜离子感受sMMO酶表达的影响开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1.1前言近些年来，全球温室效应日益严重，而甲烷作为全球主要的温室气体之一，对紫外线有着很强的吸收作用，在温室气体中重要性仅次于co2。

但是甲烷在排放至大气之前会被一类拥有甲烷氧化能力的微生物所消耗，因此，近几年国内外科学家十分注重对这种被称为甲烷氧化菌的细菌的研究。

近期研究发现，铜离子对甲烷氧化酶（smmo）的表达有调节作用，而甲烷氧化菌中chey类调节蛋白的突变子可以减弱铜离子对smmo的抑制作用。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标、内容和拟解决的关键问题2. 问题的提出与本项目研究内容2.1铜离子对甲烷氧化酶的抑制作用铜离子对甲烷氧化酶的抑制作用很早就被发现，van der ha 等发现[22]铜离子含量的增加对 smmo 活性的增加没有影响，当铜离子的浓度达到 0.64 mg/l 时，对 smmo 有抑制作用。

但chey基因对这种抑制作用的研究才刚刚起步，由于嗜甲烷菌在地球温室作用中的特殊地位，这个作用引起了研究者的极大兴趣。

由于发现较晚，目前我们仅局限于研究嗜甲基菌5gb1c中chey基因的突变子，很多科学问题还有待于进一步的阐述和研究。

3. 研究的方法与方案

3.1 研究方案3.1.1 chey响应铜元素调节smmo表达的分析（1）chey的表达和纯化：用pcr 方法将chey基因扩增并克隆至蛋白表达通用载体的pet28a( )，然后将重组质粒转化至宿主菌株e. coli bl21(de3)。

iptg诱导表达，超声破碎，获得上清。

若该蛋白形成包涵体，则采用5 m尿素洗脱复性的方法回收可溶性蛋白。

4. 研究创新点

特色或创新之处国内目前基本没有关于CheY基因响应铜离子机制的研究，本研究是对此项课题的有力补充。

5. 研究计划与进展

研究计划及预期进展2017.11-2017.12铜离子环境下的甲烷氧化菌培养2018.1-2018.2甲烷氧化菌CheY基因突变体的筛选2018.3-2018.4CheY基因突变体的鉴定、验证突变体对铜离子信号的响应2018.4-2018.5突变体响应铜离子信号机制的研究预期进展1. 成功分离并鉴定CheY基因 2. 验证突变体对铜离子信号的响应3. 成功完成对响应机制研究的推理