耐盐植物内生细菌的分离纯化与初步鉴定开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

1研究意义盐碱土是盐土和碱土以及各种盐化和碱化土的总称，是地球上广泛分布的一种土壤类型。

盐碱土在中国分布广泛，主要集中分布于西北、华北、东北以及东部沿海地区，总面积达3.6107hm2，占全国可利用土地面积的4.88%，其中，滨海盐碱土约1.3106hm2[1]。

中国拥有长达18000km的海岸线和众多岛屿，海岸带盐土资源十分丰富，主要分布在渤海西岸、东南沿海各省市，多属中国沿海经济发达地区[2]。

2. 研究的基本内容和问题

1研究目标筛选获得50株以上耐盐性植物内生细菌菌株，验证其对高盐胁迫下植物抗逆性的影响，进而建立一套相互适应的作物-内生细菌体系，从而丰富植物内生菌资源，为通过微生物学技术提高土壤地力、以及滨海作物提质增产提供科学依据。

2研究内容1）采集滨海地区浙江省慈溪市滨海耐盐碱试验地（3019`10``n,12122`36``e）的耐盐植物样品五种，从中分离纯化出内生细菌；2）将分离纯化的耐盐性植物的内生细菌进行耐盐性测定，再进一步筛选出对于主要农作物具有促生效应的内生细菌。

3）对筛选出的优势内生菌株通过生态学特征、生理生化特征、16s rdna序列分析等方法，将优势菌株进行初步鉴定。

3. 研究的方法与方案

1研究方法1.1样品采集处理与消毒植物内生细菌存在于植物各个组织的细胞内和细胞间隙中，因此在分离内生细菌之前，必须对植物组织表面进行消毒，避免表面细菌的污染。

目前使用的表面消毒法有4种：①使用表面消毒剂，包括次氯酸钠、漂白粉、乙醇、h202、hgc12、氯胺t等；②火焰烧组织表面消毒，植物组织在75%的乙醇浸泡30s，然后在火焰上烧尽乙醇；③紫外线消毒，将植物组织置于紫外光下1h；④用75%的乙醇擦植物组织表面后，用无菌刀片取植物中部组织的消毒方法。

目前在实验中所采用的消毒方法是内生细菌分离表面消毒处理的较标准化程序：无菌水、商品净化剂反复冲洗植物材料，根据植物决定表面消毒剂（如次氯酸钠）的处理时间，再依次用硫代硫酸钠、酒精、无菌水冲洗等。

4. 研究创新点

本项目致力于建立内生细菌与作物优化组合体系，发挥内生细菌对植物栽培种的特异性和宿主植物对内生细菌的接受能力，以提高作物的耐盐性和产量，并应用于大田生产实践。

5. 研究计划与进展

2017年12月-2018年1月：查阅和收集资料，明确具体研究方案；2018年1月-2018年2月：采集滨海地区耐盐植物样品，菌种富集，初筛，复筛；2018年2月-2018年3月：将分离纯化的耐盐性植物的内生细菌进行耐盐性等测定，进一步筛选出对于主要农作物具有促生效应的内生细菌；2018年3月-2018年4月：再对筛选出的优势内生菌株通过生态学特征、生理生化特征、16s rDNA序列分析等方法，将优势菌株进行初步鉴定；2018年5月-2018年6月：系统整理研究成果，撰写论文。