解淀粉芽孢杆菌基因RBAM_004640的过表达研究开题报告

全文总字数：1301字

1. 研究目的与意义

目的：解淀粉芽孢杆菌（bacillus amyloliquefaciens）fzb42属于产芽孢且好氧的枯草芽孢杆菌类，是一株革兰氏阳性的发酵杆状细菌，其研究背景较为深入，具有广泛抑制真菌或细菌的功能。

解淀粉芽孢杆菌的生物作用受其内部各基因的调控，而菌落的周围环境又会对基因表达产生一定的刺激作用，反之基因控制菌类功能可反作用于周围环境。

意义：中外许多科研人员都试图将这种菌类作用于植物根部，探索菌类与植物生长的相互作用。

2. 国内外研究现状分析

国内：近年来，随着科研人员们对解淀粉芽孢杆菌的深入探索，他们越来越多地关注解淀粉芽孢杆菌的新应用和基因功能，大量分子实验的进行为探究解淀粉芽孢杆菌在分子水平的抑菌机制奠定了优良基础，也确实得出了一些可观的实验结果。

科研人员们从各类植物和土壤中分离提取解淀粉芽孢杆菌的不同菌株，研究其特异性抑菌作用。

国外：实验研究逐渐深入到分子水平，已经利用重叠延伸法将枯草芽孢杆菌的启动子psj2和绿色荧光蛋白基因的orf相连，然后构建绿色银光蛋白表达盒，再以rco r i和pst i双酶切法将表达盒与pus186载体连接，从而转化解淀粉芽孢杆菌的tb2菌株，获得可发出绿色荧光的工程菌；还通过表型筛选和克隆测序等分子实验，利用解淀粉芽孢杆菌mu转座突变子发现了2个新的抑菌作用调节基因，证明了人工mu转座技术在解淀粉芽孢杆菌的功能基因研究中的快速有效作用。

3. 研究的基本内容与计划

内容：构建fzb42的基因rbam_004640的合适载体，设计引物连接，转入合适菌株观察表型；构建fzb42的基因缺失突变株，比较确实突变株与野生株的表型，获取基因rbam_004640的过表达表现。

其中需要用到一系列的分析技术，如常规pcr、重叠pcr、电泳、基因敲除、酶切、酶连等。

时间规划：（1）2016.1.152016.2.20：查找相关资料，熟悉文献内容，对实验过程有个大致了解，撰写开题报告和文献综述。

4. 研究创新点

参考中外文献，在前人研究的基础上，探究新型基因的过表达效果。

着重于熟悉掌握分子水平的实验技巧，如重叠pcr、基因敲除、突变株构建等，重复试验对比，探究基因iola和基因bcd对解淀粉芽孢杆菌抗生素产生影响的测试。

结合实验结果整理数据。