斑马鱼鳃组织呼吸代谢酶变化对束丝藻毒素的响应开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述）

水华束丝藻(aphanizomenon flos-aquae) 是一种在世界性富营养化水体中快速繁殖的丝状蓝藻。由于水华束丝藻能分泌束丝藻毒素（aphantoxins）或麻痹性贝类毒素（paralyticshellfish poisons (psps)），是一种毒性极强的神经毒素，对人体健康和环境安全将产生严重的影响。麻痹性贝毒（paralyticshellfishposoning，简称psp）是一种神经毒素，因人们误食了含有此类毒素的贝类而产生麻痹性中毒的现象，所以称之为麻痹性贝毒。其毒理与河豚毒素（ttx）相似，主要是通过对钠离子通道的影响而抑制神经的传导。麻痹性贝毒在许多种不同的贝毒中毒事件属最严重，因其强烈毒性，经常造成消费者中毒死亡事件，并且具有广布性与高发性。

在1999年之前，中国已有24人死于麻痹性贝毒中毒。中国政府规定上市贝类麻痹性贝毒必须低于4mu/g。虾夷扇贝各组织器官psp的毒性高低依次是：消化腺裙边腮性腺贝柱。psp毒素的毒性很强，摄入1mg就可致人死亡。

斑马鱼是模式生物之一,成年鱼个体小，易于饲养 成年斑马鱼个体长约4~5cm，雄鱼体修长，雌鱼体肥大。一个盛3升水的鱼缸可养殖20~30尾成鱼，因此在有限的空间可以养殖相当大的群体，可开展对样本需求量大的研究。发育快速、性成熟期短、繁殖力强。斑马鱼属脊椎动物，其生长发育过程、组织系统结构与人有很高的相似性，两者在基因和蛋白质的结构和功能上也表现很高的保守性，因此斑马鱼是研究人类疾病发生机理的优良模式动物。

2. 研究的基本内容与方案

随着经济社会发展、人们物质生活丰富及排泄物种类的不断增加，注入水体中的营养盐类型和数量随之急剧增加，造成水体富营养化程度日趋严重及蓝藻水华的频繁暴发，这已是当今世界必须直面的严重水环境难题。本文以滇池水华期间（2009）采集分离的水华束丝藻为材料，藻株经实验室、鉴定、分离、纯化、培养、细胞内毒素抽提和纯化，毒素含量和成分分析后，通过腹腔注射（5.3 and7.61gstxeq/kgbw作为低浓度和高浓度）的方法对斑马鱼进行毒素处理，在染毒后的24小时内的不同时间点（0,1,3,6,9,12 和 24h），取斑马鱼鳃组织，提取线粒体并在处理后，对鳃组织的细胞色素氧化酶（cytochrome oxidase，cco）（紫外分光光度法）、琥珀酸脱氢酶（succinate dehydrogenase，sdh）（紫外分光光度法）、延胡索酸还原酶（fumarate reductase ，frd）（紫外分光光度法）、乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase ，ldh）（紫外分光光度法），丙酮酸激酶（pyruvate kinase ，pk）（elisa测定实验试剂盒）、精氨酸激酶（arginine kinase ，ak）（铋钼磷三元杂多酸体系定磷法）、苹果酸脱氢酶(malatedehydrogenase ，mdh)（紫外分光光度法）等呼吸代谢相关酶类进行研究，旨在揭示斑马鱼鳃组织呼吸代谢变化对束丝藻毒素神经毒性的响应机制，为水产养殖，野生动物保护及人类健康和环境安全提供新的参考依据，减少生态的破坏以及政府和人民的损失。

研究内容：

3. 研究计划与安排

第1周：资料查找，筛选，阅读，讨论和立论：

第2周：研究思路和研究方法的设计、筛选和选择（根据自身能力和实验室条件确定）和细化，讨论和方案定稿（包括设备，药品等）；

第3周：设备仪器的熟悉，讨论，器具和器皿的准备，药品的准备，包括定购必要的药品，进行等；

4. 参考文献（12篇以上）

[1] 孙智慧，贾顺姬，孟安明，等.斑马鱼:在生命科学中畅游[j]，生命科学，2006,18（5）:431-436.

[2] 师喆，吴 军，吴顺华，等.不同价态砷染毒对大鼠丙酮酸激酶活力的影响[j]，新疆医科大学学报，2010 ,33(4):334-337.

[3] 张志峰，王思锋，霍继革，等.单环刺螠对硫化物暴露的呼吸代谢适应[j]，中国海洋大学学报，2006,36（4）:639-644.