DNMT3A基因启动子区-448A>G位点与胃癌和肺癌发生的相关性研究开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述）

肿瘤是危害人类健康的重要疾病之一，长期以来，肿瘤形成的原因及肿瘤早期诊断、治疗的方法一直悬而未决。目前认为，肿瘤的形成是多因素、多阶段和多基因改变协同作用的结果，原癌基因激活与抑癌基因的失活是肿瘤发生的分子基础【1】。肿瘤抑制基因启动子区cpg岛的重新甲基化可能是一些人类肿瘤细胞中抑癌基因失活的机制之一【2】。催化dna甲基化的是dna甲基转移酶(dna．methyltransferases，dnmts)。dnmts包含三个家族dnmtl、dnmt2和dnmt3【4】。dnmtl是哺乳动物中起维持甲基化作用的主要dna甲基转移酶【4】，dnmt2是真核生物中最小的dna甲基转移酶，目前还不是很清楚它的生物学功能。dnmt3家族包括dnmt3a，dnmt3b和dnmt3l。dnmt3a、dnmt3b的主要作用是催化dna重新甲基化。在脊椎动物细胞dna链中cpg岛会存在着甲基化现象，cpg岛的甲基化主要是通过57胞嘧啶的甲基化来完成。在细胞分化、胚胎发育、基因组印记、x染色体失活以及转座子的抑制等过程中，都存在基因dna链中cpg岛的甲基化现象【5】。与正常细胞不同的是，肿瘤细胞会同时存在整个基因组普遍低甲基化和局部cp6岛高甲基化现象【6-8】，这种高甲基化现象可能会导致肿瘤抑制基因的异常沉默。越来越多的研究表明，dna甲基转移酶与肿瘤的发生、发展直接相关。beaulieu等在hctll6等细胞系中敲除dnmt3a和dnmt3b后可以诱导肿瘤细胞的调亡，表明dnmt3a／3b对于肿瘤细胞的生长和基因沉默有非常重要的作用【9】。在同时敲除dnmtl和dnmt3b的大肠癌细胞系的研究表明，dnmt3b可能也起到了维持甲基化酶的作用【10】。有研究发现，dnmt3b在诸如胃癌，肝癌，结肠癌，膀胱癌等肿瘤组织中存在明显的高表达，这些都表明dnmt3a／3b可能在肿瘤的发生、发展过程起到一定作用。

目前肺癌发病率及病死率呈上升趋势；在我国，肺癌居各类恶性肿瘤之首[11-12]。肺癌的诊断主要依靠影像学、痰脱落细胞学、支气管镜活检及血清肿瘤标志物的检测等技术[13]，但这些诊断技术的应用并没有明显改善肺癌患者的病死率。因此，寻找肺癌更有效的早期诊断方法是提高患者疗效及生存质量的关键。研究发现，dna甲基化调控机制与肺癌发病密切相关[14]，同时亦发现其发病过程中的早期生物学标志。血液在临床诊断肺癌中，因其低刨伤、低价格、高敏感性而被广大患者接受。胃癌是我国最常见的消化道肿瘤，死亡率非常高，严重危害着人们的身体健康。

因此，我们拟研究湖北地区胃癌和肺癌患者人群中dnmt3a基因-448ag位点的突变情况，进一步探索dnmt3a基因-448ag位点与胃癌和肺癌发生的相关性，并探讨其对肺癌和胃癌早期辅助诊断的临床价值。或许可以推动医学治疗癌症的发展，意义重大。

2. 研究的基本内容与方案

2.1基本内容：dna甲基化修饰是表观遗传学的重要机制之一，有大量的研究显示肿瘤细胞存在dna甲基化状态的改变及dnmts(dna甲基化转移酶)的异常表达。大多数肿瘤细胞中的dnmts水平显著高于正常细胞，并与抑癌基因启动子区高甲基化状态相关。先前的研究显示胃癌和肺癌中dnmt3a都是高表达的，说明dnmt3a可能在胃癌和肺癌的发生发展中起一定作用。dnmt3a可能是胃癌和肺癌的一个重要的候选基因。-448ag位点位于dnmt3a启动子区域，已被证实是一个功能性位点，能影响dnmt3a启动子活性。本研究拟检测dnmt3a基因的启动子区-448ag在湖北地区胃癌/肺癌人群与正常对照组中的分布，探寻其与胃癌/肺癌发生的相关性。

2.2拟采用技术手段

1.收集胃癌和肺癌患者的血液样本，并提取全基因组dna

3. 研究计划与安排

3、进度安排

第1周：调研阅读文献，准备开题；

第2周：完成开题报告，购置和准备实验用品；

4. 参考文献（12篇以上）

【1】birda．molecularbiology,methylationtalkbetweenhistonesanddna[j]．science，2001，294(5549)：2113—2115．

【2】engc，hermanjg,baylinsb，eta1．abird’seyeviewofglobalmethylation[j]．natgetet，2000，24（2)：101—102．

【3】bestorth．thednamethyltransferasesofmammals[j]．hummoigenet．2000．9(16)：2395-2402．