果蝇细胞凋亡调控蛋白dIAP作用于toll途径开题报告

1. 研究目的与意义（文献综述）

细胞凋亡途径和toll途径都是决定细胞生存的关键途径，这些途径包括大量的酶及调控因子。如果能够探究出这两者之间的关系，对于天然免疫和细胞凋亡的研究都具有极其重要的影响。在哺乳动物中，cIAP1是参与TLC途径的，但在果蝇中两者之间的关系尚未有研究报告。其中，果蝇中细胞凋亡途径中的dIAP1通过抑制dronc和drice从而抑制凋亡，而有研究表明dIAP1具有泛素化酶（E3酶）活性，toll途径下游的NF-KB（包括DIF，drosal等）受泛素化调节，猜测dIAP1可以通过作用于NF-KB从而调控toll途径。

2. 研究的基本内容与方案

1、从基因文库调取diap1基因， cact基因，dif基因，drosal基因，并制备大肠杆菌克隆

设计相应引物，由公司合成，通过pcr从果蝇基因文库中调取diap1基因， cact基因，dif基因，drosal基因；在并37摄氏度peg存在利用t4连接酶与t载体，pac载体连接；利用氯化钙制备感受态细胞，将上诉外源基因用热激法转化到大肠杆菌中，涂布平板，制备克隆。

2、克隆筛选

3. 研究计划与安排

第1－2周：查阅相关文献资料，明确研究内容，了解毕业课题的意义以及论文所涉及到的实验方法和技术方案，为课题顺利进行做前期大量的文献调研工作，确定方案，完成开题报告。

第3－9周：从基因文库调取diap1基因， cact基因，dif基因，drosal基因，并制备大肠杆菌克隆；克隆筛选测序并保种。

第10－13周：将diap1基因， cact基因，dif基因，drosal基因转化到果蝇s2细胞系中 ；蛋白提取及蛋白间相互作用的鉴定

4. 参考文献（12篇以上）

1．brucea.hay and mingguo,caspase-dependent cell death in drosophila,cell[j],july14,2006.

2. ting-chun yeh and shawn b.bratton,caspase-dependent regulation of the ubiquitin-proteasome system through direct substrate targeting, pnas[j] august27,2013 vol.110 no.35

3. jijie chai,nieng yan,jun r huh,jia-wei wu,wenyu li,bruce a hayyigong shi, molecular mechanism of reaper-grim-hid-mediated suppression of diap1-dependent dronc ubiquitination, nature structural biology[j] vol10 num9 sep2003.

4.maximiliano javier jimenez-dalmaroni,m.eric gerswhin ,iannis e.adamopoulos, the critical role of toll-like receptors from microbial recognition to