细胞周期调控蛋白hSkp1的质粒构建开题报告

1. 研究目的与意义

skp1是s期激酶相关蛋白1，在真核细胞中普遍存在，通过参与形成scf复合体而参与到泛素蛋白降解途径。参与调控生物的细胞循环，生物节律，生物抗逆性以及雄性不育等许多重要的过程。skp1是一个多功能的蛋白。skp1在动植物以及微生物中都有广泛的研究。有研究表明，skp1在酵母中能参与纺锤体checkpoint的激活以及信号传递。还有研究表明skp1蛋白的超量表达能够影响小鼠胚胎的发育，阻断skp1蛋白的表达，小鼠的受精卵发育得到促进，其后续研究表明，skp1蛋白被阻断后，会使纺锤体出现异常，例如多级纺锤体、纺锤丝散乱不规则、纺锤体畸变甚至断裂。此外，他们还发现skp1蛋白被阻断后，小鼠受精卵的染色体在赤道板上排列紊乱的几率提高，也就是说出现染色体变异的几率增高从而导致胚胎的死亡率增高。他们从实验中得到了skp1蛋白在小鼠胚胎发育过程中起关键作用，并推测哺乳动物中skp1在激活纺锤体checkpoint通路过程中发挥重要作用。在植物方面，有人研究了skp1与小麦雄性不育之间的联系，并推测该基因在花粉粒发育过程中下调表达可能影响了小麦花粉粒发育过程中蛋白质泛素降解途径而导致雄性不育。还有人研究了skp1对于植物抗药性的研究，发现skp1对于植物生长以及抗药性等方面都起着十分重要的作用。

本实验研究的目的以及意义

2. 研究内容和预期目标

1、人skp1基因的确定

2、对于skp1基因进行pcr扩增，鉴定及回收

3. 研究的方法与步骤

本课题主要采用基因工程的方法，其中涉及到电泳以及酶切等技术

4. 参考文献

[1] 王宇峰.skp1蛋白在小鼠早期胚胎发育过程中的功能研究[d].南京.南京医科大学.2008

[2]徐梦恩，黄涛，刘丽娟，杨飞.猪skp1基因的克隆及其在梅山猪与杜洛克猪卵泡中的表达研究.石河子大学动物科技学院.2015.42（7）：1640-1646.

[3]孙新艳，魏莹，韩晓玉等.黄瓜s期激酶相关蛋白skp1的原核表达及其多克隆抗体的制备[d].华北农学报.2017.06

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-25~2022-3-16），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译；

（2）第3周~第6周（2022-3-19~4-13），设计引物、选择合适酶切位点、质粒抽提、细胞培养等实验、初步设计；

（3）第7周~第11周（2022-4-16~5-18），目标基因扩增、剪切、载体连接、转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子的细胞表达等