夹竹桃碱致突变性的有效拮抗剂筛选研究开题报告

1. 研究目的与意义

近几年来，我国相继引入了很多种外来植物，其中就有夹竹桃 (thevetia peruviana)，夹竹桃属于龙胆目夹竹桃科的常绿直立灌木，个头中等，大的也能长得较大。夹竹桃原产于伊朗印度等温暖的地带，现因夹竹桃喜光耐阴易栽培抗旱抗涝，故引进中国，不仅如此夹竹桃还有对大气中的有害成分吸收的能力，在保护环境，保持水土方面有着不俗的成绩。虽然夹竹桃里面的生物碱有强心剂的作用，夹竹桃甙是一种强心剂，具有强心、利尿、祛痰、定喘、镇痛、去瘀之功效，同时在体内、体外有抗癌功效。但是过量使用会有致死的风险，相关研究表明，服用10-60片夹竹桃就可能导致中毒乃至死亡。夹竹桃花朵亮丽，花期长，具有很强的适应性，而且栽培简易，管理粗放，有保持水土的作用，而且夹竹桃有很强的抗逆性，可以吸收净化空气中的毒害气体，对环境具有很强的修复能力，所以常常作为观赏绿化花木被栽植在庭院或道路周围。

众所周知，现代的日常生活都离不开绿色植物，而绿色植物时长会招惹病虫害，这时候化学源的农药气味大危害性也高，所以就开始寻找植物源头的杀虫剂，比较简便的植物杀虫剂就是烟草丝水溶液然后再作用于植物上可以起到不错的效果而且对人体的危害还不是很大，所以就考虑能不能再多找一些植物源的像烟草那么有效的杀虫剂通过浸泡则可以产生足以杀死病虫的物质。这个时候就想到了毒性对人体较轻的夹竹桃进行研究，以微核技术为手段进行对蚕豆根尖的实验找到对夹竹桃浸出液有拮抗作用的药品进行植物的保护及害虫的查杀。

2. 研究内容和预期目标

主要研究内容：

（1）夹竹桃的碱性物质提取：选取50ml的0.025mol/ml的硫酸40°c下浸提5h得到的碱性物质在340nm出可以测得明显吸光值；

（2）选用较为常见的香菇多糖、枸杞、甘草作为拮抗剂。

3. 研究的方法与步骤

研究方法 采用蚕豆根尖细胞微核监测技术，分别探讨不同浓度的夹竹桃提取物对蚕豆根尖细胞微核率的影响，得出相应实验数据；再研究维生素c及普洱茶溶液对这些致畸效应拮抗作用的强弱。

步骤 （分为预备试验与正式试验。预实验按照蚕豆的浸种与催芽，染毒，固定根尖细胞，染色，制片，镜检等步骤，了解夹竹桃提取物的染毒剂量范围，目的不仅在于保证染毒的最高剂量不会使根尖产生致死效应，也在于确定剂量-效应关系最敏感受试物浓度范围。确定合适的染毒浓度范围后再按照以上步骤做正式实验。）

4. 参考文献

[1] qian x w. mutagenic effects of chromium trioxide onroot tip cells of vicia faba[j]. zhejiang univ sci,2004, 5(12): 1570-1576.

[2] 刘红慧. 马兜铃酸、甘草、枸杞、香菇多糖对遗传物质作用的meta分析[d]. 武汉科技大学, 2012.

[3] 冯宣军, 彭翠萍. 甜叶菊水浸液处理蚕豆根尖细胞的抗畸变效应[j]. 安徽农业科学, 2010, 38(18)：9470-9471.

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17-20周---2022-2022-2学期第2周：接受任务书。查阅资料，选择夹竹桃和代表性中草药样品，准备开题报告，外文论文翻译。

（2）第3周---第6周：综合相关文献资料，撰写开题报告完成后在系统中提交（3月20日前上交），设计微核实验方案并准备预试验，第5周到第6周预实验按照蚕豆的浸种与催芽，染毒，固定根尖细胞，染色，制片，镜检等步骤，了解夹竹桃提取物的染毒剂量范围，目的不仅在于保证染毒的最高剂量不会使根尖产生致死效应，也在于确定剂量和效应关系最敏感受试物浓度范围。

（3）第7周---第12周：夹竹桃和代表性中草药样品确定和收集（通过预实验确认药品）；处理蚕豆根尖方法优化，并确认好药品用量及浓度梯度设计。蚕豆微核技术考查不同样品的诱变作用预实验数据整理利用卡方检验和泊松分布统计得出微核率。优化实验方案，正式实验和必要的重复至少三组。比较所得数据，发现所选夹竹桃碱性遗传毒性的影响强度及选取的两种拮抗剂拮抗强度。