度洛西汀在大鼠体内的药代动力学研究开题报告

1. 研究目的与意义

度洛西汀是一种选择性的5-羟色胺(5-ht)和去甲肾上腺素(ne)再摄取抑制药。其适应证为：（1）用于治疗重型抑郁症。（2）用于糖尿病周围神经痛。（3）用于女性中至重度应激性尿失禁。度洛西汀抗抑郁与中枢镇痛作用的机制尚未明确，但认为与其增强中枢神经系统5-羟色胺能与去甲肾上腺素能功能有关。临床前研究结果显示，度洛西汀是神经元5-ht与ne再摄取的强抑制剂，对多巴胺再摄取的抑制作用相对较弱。体外研究结果显示，度洛西汀与多巴胺能受体、肾上腺素受体、胆碱能受体、组胺能受体、阿片受体、谷氨酸受体、gaba受体无明显亲和力。度洛西汀不抑制单胺氧化酶。

随着度洛西汀在临床上的广泛应用，其临床不良反应的报道不断增多，涉及肝脏毒性的报道更是引起人们的关注，chan cy等报道了400例和度洛西汀可能有关的肝毒性临床案例，度洛西汀还会引起患者凝血时间延长。livertox网站将度洛西汀的肝脏毒性作为一个专题进行讨论，度洛西汀有肝脏毒性，并且有肝衰竭甚至死亡的案例，临床中有0.3%的患者因转氨酶升高而终止使用度洛西汀，在一项研究中，度洛西汀用药组丙氨酸氨基转移酶（alt）升高并大于正常值上限3倍的概率为1.1%，而安慰剂组仅为0.2%。另外由于潜在的肝毒性问题，酗酒和有慢性肝病史的患者禁止使用。

目的：本实验通过建立大鼠血浆中度洛西汀浓度的高效液相色谱-串联质谱法 (hplc-ms/ms)，比较同时给药后不同时间抽取的大鼠血浆进行药代动力学分析。

2. 研究内容和预期目标

研究内容：本研究拟建立HPLC-MS/MS方法定量测定度洛西汀在大鼠血浆中的浓度，用于大鼠体内度洛西汀药代动力学的研究。重点是研究大鼠血浆样本的预处理方法和进样测定条件及量效相关性分析。

预期目标：能得出药物在体内药代动力学行为能直观的反应其在体内的暴露量，而药物在体内的暴露量亦与毒性有显著的相关性。

3. 研究的方法与步骤

1.大鼠的预处理：将大鼠 (n = 6) 同等条件下饲养3天后，禁食不禁水12 h。将盐酸度洛西汀用水溶解后灌胃给药 (40 mg·kg¹)。

2.分别于给药前 (0 h) 及给药后0.5、1、1.5、2、3、5、8、11、24 h 从眼眶静脉丛取血0.5 ml置于经肝素处理的离心管中，离心 10 min (3000 r·min¹)，分离血浆，于30℃保存待测。

2.标准系列样品和质控样品的制备：取大鼠空白血浆48μl，依次加入度洛西汀系列标准曲线工作液或系列质控工作液2μl，制备成 10.00、30.00、100.0、300.0、1000、2000、3500 和5000 ng·ml¹系列标准血浆样品和 10.00 ng·ml¹(lloq)、20.00 ng·ml¹(qcl)、1200 ng·ml¹ (qcm)、4000 ng·ml¹(qch) 系列质控血浆样品。

4. 参考文献

[1]highlights of prescribing information of cymbalta (duloxetine hydrochloride) delayed-release capsules for oral use. initialu.s.approval: 2004.

[2]薛瑞,徐晓丹,李诺敏,张有志,李云峰.度洛西汀抗抑郁活性评价及毒性研究[j]. 中国药理学通报,2010,11:1471-1475.

[3]chan cy, new ls, ho hk, chan ec. reversible time-dependent inhibition of cytochrome p450 enzymes by duloxetine and inertness of its thiophene ring towards bioactivation. toxicology letters. 2011, 206(3): 314-324.

5. 计划与进度安排

1. 2022-1-06～2022-3-12 接受任务、查阅和翻译文献、撰写及完成开题报告

2. 2022-3-13～2022-4-21 研究大鼠血浆样本的预处理方法

3. 2022-4-22～2022-5-10 研究采用hplc-ms/ms方法定量测定条件