平衡透析法评价度洛西汀血浆蛋白结合率开题报告

1. 研究目的与意义

本课题研究背景如下：度洛西汀(duloxetine)是一种选择性的5-羟色胺(5-ht)和去甲肾上腺素(ne)再摄取抑制药。度洛西汀抗抑郁与中枢镇痛作用的机制尚未明确，但认为与其增强中枢神经系统5-羟色胺能与去甲肾上腺素能功能有关。临床前研究结果显示，度洛西汀是神经元5-ht与ne再摄取的强抑制剂，对多巴胺再摄取的抑制作用相对较弱。体外研究结果显示，度洛西汀与多巴胺能受体、肾上腺素受体、胆碱能受体、组胺能受体、阿片受体、谷氨酸受体、gaba受体无明显亲和力，度洛西汀不抑制单胺氧化酶。所以度洛西汀是一种很好的抗精神、抗抑郁、抗焦虑症药物。

临床研究度洛西汀的药物代谢动力学(pharmackinetices)时，血浆蛋白结合率（binding rate of plasmaprotein,brpp）是重要参数之一。血浆蛋白结合率系指药物吸收入血液后，多数与血浆蛋白结合，治疗剂量的药物与血浆蛋白结合的量占药物总浓度的百分率。各种药物以一定的比率与血浆蛋白结合,在血浆中常同时存在结合型与游离型。药物吸收进入血液以后，一部分游离于血浆之中，称为游离型药物，另一部分则会和血浆蛋白相结合，称为结合型药物。只有游离型药物可以透过生物膜进而发挥药效；结合型药物不能透过生物膜，无药理活性。当两种及以上药物联合应用时，蛋白结合能力较强的药物分子占领结合部位，使其他药物不能得到充分的结合，以致后者的游离部分增多，药效增强。这种相互作用对一些蛋白结合率较高的药物具有重要意义。而度洛西汀与人体血浆蛋白有高度亲和性(大于90%),主要与人血清白蛋白和α₁-酸性糖蛋白结合。

近年来，随着药动学的深入研究，药物与血浆蛋白的结合率已成为药学领域中的研究热点，特别是对于那些血浆蛋白结合率高的药物。因此，研究者们发展出了一些测定药物与血浆蛋白结合的方法，包括平衡透析法、微透析法、超滤法、超速离心法、光谱法、高效亲和色谱法(hpac)、高效前沿分析(hpfa)等。本课题所采用的是平衡透析法，平衡透析是利用透析膜将蛋白质溶液与缓冲液分隔开，建立两者之间的一种平衡状态,只有分子量小的药物小分子可以通过。透析的动力是扩散压，扩散压是由横跨膜两边的浓度梯度形成的。透析的速度与膜的厚度、透析的小分子溶质在膜两边的浓度梯度及透析温度等因素有关。平衡透析法通常被认为是测量药物血浆蛋白结合率的参考方法，因为它能直接测出来与蛋白结合的药物小分子的数量,这是分析蛋白与小分子物质结合的关键，从而能求出结合位点数及结合常数，得到比较准确的结果。平衡透析法虽然操作复杂且费时，但是分析成本低，可以直接得到游离小分子的浓度，仍然为常规的测定方法，且被认为是比较准确的方法。

2. 研究内容和预期目标

本课题拟采用平衡透析法测定度洛西汀的血浆蛋白结合率，重点研究平衡透析装置可用性、透析条件和计算血浆蛋白结合率的方法分析。主要研究内容包括：查阅学术文献了解度洛西汀的背景资料，进一步研究平衡透析法的基本原理及所需的试验材料和测试装置可用性，熟悉平衡透析的操作步骤，注意方法可行必备的条件，可先进行预实验，总结经验教训，正式研究结束后，针对实验结果数据，即所测血浆蛋白结合率选择计算方法分析，得出一定结论。

3. 研究的方法与步骤

1. 查阅文献，整理所需参考资料。了解度洛西汀的研制及治疗作用相关背景资料、测定血浆蛋白结合率的意义，学习平衡透析的基本原理。平衡透析法是定量研究蛋白质与小分子结合平衡的一种传统且成熟的膜分离技术，其工作原理是基于分子大小或者重量不同，将大分子溶液和小分子溶液分别置于只允许小分子透过而不允许大分子透过的半透膜两侧，因该方法在溶液中完成，血浆和缓冲液的ph值以及离子强度保持相对恒定，可以最大限度反映体内情况，结果可靠，故经常作为经典参比方法。

2. 准备透析袋（管）、色谱仪等实验器材，购买度洛西汀标准品、配置pbs缓冲液（即透析液）等试剂，处理血浆样本，组建并操作平衡透析装置，验证其可用性。

3. 预实验操作，无外力驱动条件下，药物分子扩散透过半透膜，当透析达到平衡时，用色谱法测定膜两侧溶液中小分子的浓度（c₁，c₂）。熟悉平衡透析的可行方法和注意事项。

4. 参考文献

[1] schneidere k, huang j x, carbone v, et al. drug–drug plasma protein binding interactions of ivacaftor[j]. journal ofmolecular recognition, 2015, 28(6):339-348.

[2] 刘睿, 谢跃生, 潘桂湘, 等. 药物血浆蛋白结合率测定方法的研究进展[j]. 天津中医药, 2007, 24(6):526-528.

[3] 章海鑫. 双氟沙星血浆蛋白结合率及其与药代动力学关系的研究[d]. 上海海洋大学, 2012.

5. 计划与进度安排

1. 2022-01-06～2022-03-12 接受任务、查阅和翻译文献，撰写及完成开题报告

2. 2022-03-13～2022-04-21 研究平衡透析装置可用性

3. 2022-04-22～2022-05-10 研究平衡透析方法和条件