人类FOR20蛋白的定点突变（L106A）研究开题报告

1. 研究目的与意义

背景、目的及意义

FOR20(20 kDa FOP-related蛋白质),一个守恒的centrosomal蛋白质,研究表明能够抑制s阶段进展,防止Plk1的目标(polo-like激酶1)中心体,FOR20与Plk1交互。又有研究表明和细胞周期进展,关键是之前促进微管解聚,促进无特征映射细胞迁移。实验以人类中心体蛋白FOR20为研究对象，对该基因进行体外定点突变，然后对定点突变的位置进行验证。

2. 研究内容和预期目标

内容和预期目标

整个实验包括以下俩点：（1）通过对for20的基因序列进行分析，确定保守氨基酸位点，然后确定突变的氨基酸位置。（2）针对该突变的氨基酸设计合适的引物序列，定点突变。

实验的预期目标即准确构建人类for20蛋白的定点突变（l106a）。

3. 研究的方法与步骤

研究方法、步骤

（1）通过对该蛋白的基因序列进行分析，确定保守氨基酸位点，然后确定突变的氨基酸位置，然后合成蛋白质的基因序列；方法就是通过同源比对，确定不变残疾与可变残基。

（2）针对该突变的氨基酸设计合适的引物序列；引物设计有 3 条基本原则:首先引物与模板的序列要紧密互补，其次引物与引物之间避免形成稳定的二聚体或发夹结构，再次引物不能在模板的非目的位点引发dna聚合反应(即错配)。

4. 参考文献

主要参考文献

1. feng s, song y, shen m, xie s, li w, lu y, yang y, ou g, zhou j, wang f, liu w, yan x, liang x, zhou t. microtubule-binding proteinfor20 promotes microtubule depolymerization and cell migration. cell discov. 2017 sep 5;3:17032.

2. harmer j, qi x, toniolo g, patel a, shaw h, benson fe, ginger ml, mckean pg. variation in basal body localisation and targeting of trypanosome rp2 and for20proteins. protist. 2017 aug;168(4):452-466.

5. 计划与进度安排

具体进度安排（包括序号、起迄日期、工作内容）

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-24~2022-3-8），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译；（2）第3周~第6周（2022-3-11~4-5），选择突变位点，设计引物，合成基因序列等初步设计；（3）第7周~第11周（2022-4-8~5-11），目标基因扩增、剪切、细胞转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子等（4）第12周~第14周（2022-5-13~6-2），整理、撰写论文，完成；一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图，一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图（5）第15周~第16周（2022-6-3~6-12），提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文翻译、图表等，毕业答辩。