中心体蛋白FOR20点突变（T69A）的研究开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景：

1、微管结合蛋白for20促进微管解聚和细胞迁移。

微管是由αβ-小管素杂底组合而成的高度动态的丝,在许多细胞过程中发挥着重要作用,包括细胞分裂和迁移。微管动力学受到微管相关蛋白(map)的严格调节, 这些蛋白质通过与微管或游离小管二聚体结合而起作用。for20(fop相关蛋白 20kda),一种保守的蛋白质至关重要的纤毛发生和细胞周期进展，是一个以前没有特征的map,促进微管解聚和促进细胞迁移。for20不仅直接与微管结合,而且通过降低微管生长速率、提高离聚速率和突变频率来调节微管体外动力学。在体外微管动力学检测中,for20似乎优先与游离小管二聚体比微管相互作用。for20的消耗抑制微管解聚,促进微管在海拉细胞的诺加唑治疗后再生。此外,for20显著抑制哺乳动物细胞的个体和集体迁移。总之,for20的功能作为map,以促进微管解聚和细胞迁移。

2. 研究内容和预期目标

本实验属于分子生物学中的基因重组内容，以人类中心体蛋白for20为研究对象，对该基因进行体外定点突变，然后对定点突变的位置进行验证。

本实验的内容由以下几个方面构成：

（1）通过对该蛋白的基因序列进行分析，确定保守氨基酸位点，然后确定氨基酸序列及二级结构

3. 研究的方法与步骤

研究方法：

以人类中心体蛋白for20为研究对象，通过对该蛋白的基因序列进行分析，确定突变位点，经pcr、重组、转化等步骤构建重组细胞，进行序列分析。

实验步骤：

4. 参考文献

[1] feng s, song y, shen m, xie s, li w, lu y, yang y, ou g, zhou j, wang f, liu w, yan x, liang x, zhou t. microtubule-binding proteinfor20promotes microtubule depolymerization and cell migration. cell discov. 2017 sep 5;3:17032.

[2] harmer j, qi x, toniolo g, patel a, shaw h, benson fe, ginger ml, mckean pg. variation in basal body localisation and targeting of trypanosome rp2 andfor20proteins. protist. 2017 aug;168(4):452-466.

[3] sakane k, nishiguchi m, denda m, yamagchi f, magari m, kanayama n, morishita r, tokumitsu h. identification and characterization of a centrosomal protein,for20as a novel s100a6 target. biochem biophys res commun. 2017 sep 30;491(4):980-985.

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-24~2022-3-8），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译； （2）第3周~第6周（2022-3-11~4-5），选择突变位点，设计引物，合成基因序列等初步设计；（3）第7周~第11周（2022-4-8~5-11），目标基因扩增、剪切、细胞转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子等（4）第12周~第14周（2022-5-13~6-2），整理、撰写论文，完成；一张基因扩增电泳检测图、一张质粒酶切电泳检测图，一张重组子构建检测图以及一张蛋白表达电泳图（5）第15周~第16周（2022-6-3~6-12），提交重组子构建的重组细胞、实验报告、英文翻译、图表等，毕业答辩。