人类中心体蛋白FOR20的75位氨基酸（Ala）的突变构建开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景：

分子量为20kda的中心体蛋白质for2可以调节微管的稳定性。在山羊脑组织提取物中也可以检测到for20，并且它与微管相关蛋白相关。for20能与纯化的微管蛋白结合并在体外抑制微管蛋白的组装。此外，for20的消耗可以抑制活hela细胞中单个微管，表明for20在定向细胞迁移中起作用。中心体蛋白for20是微管相关蛋白家族的新成员。他含有174个氨基酸，在生命活动过程中有重要作用。可以与微管直接结合，通过增加或降低微管生长速率、解聚速率和突变速率来对微管的动力进行体外调节。for20蛋白被发现的时间并不长，他能够与微管上的游离蛋白二聚体相互作用。在hela细胞上，用诺考达蹉处理微管后，for20似乎能抑制微管解聚，从而促进微管再生。还有一些研究也表明for20能显著抑制哺乳动物细胞的个体或集体迁移。

中心体是大多数动物细胞中主要的微管组织中心。中心体发生异常会导致dna合成前期收到阻滞。有研究发现通过下调中心体蛋白for20会使细胞s周期发生异常，并且有丝分裂蛋白激酶polo-likekinase1与中心体会发生解离现象。但是在查阅中心体蛋白for20相关于微管动力学的相关文献过程中我发现有关资料特别稀少，这意味着中心体蛋白for20的研究仍有待深入。

2. 研究内容和预期目标

本实验以人类中心体蛋白for20的第75位氨基酸（ala）为研究对象，对该基因进行体外突变构建。

本实验的内容由以下几个方面构成：

（1）查阅文献，分析for20蛋白的基因序列以及其特点

3. 研究的方法与步骤

研究方法：

以人类中心体蛋白for20为研究对象，了解该蛋白的序列特点，对该序列进行分析，通过pcr技术对for20蛋白进行定点基因突变，用pcr的方法对该序列进行pcr扩增，然后酶切转化；最后将转化的受体菌进行培养，抽提质粒验证构建成功与否。

实验步骤：

4. 参考文献

[1]feng s,song y,shen m,xie s,li w,lu y,yang y,ou g,zhou j, wang f, liuw, yan x, liang x, zhou t. microtubule-binding proteinfor20promotes microtubule depolymerization and cell migration. cell discov. 2017 sep 5;3:17032.

[2] harmer j, qi x, toniolo g, patel a, shaw h, benson fe, ginger ml, mckean pg. variation in basal body localisation and targeting of trypanosome rp2 andfor20proteins. protist. 2017 aug;168(4):452-466.

[3]sakane k, nishiguchi m, denda m, yamagchi f, magari m, kanayama n, morishita r, tokumitsu h. identification and characterization of a centrosomal protein,for20as a novel s100a6 target. biochem biophys res commun. 2017 sep 30;491(4):980-985.

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17-20周~2022-2022-2学期第1周~第2周（2022-12-24~2022-3-8），查阅资料，目的基因序列的确定，准备开题报告，外文论文翻译；

（2）第3周~第6周（2022-3-11~4-5），选择突变位点，设计引物，合成基因序列等初步设计；

（3）第7周~第11周（2022-4-8~5-11），目标基因扩增、剪切、细胞转化、细胞培养、转化子的检测以及重组子等