1. 研究目的与意义
| 【研究背景】多环芳烃（PolycyclicAromaticHydrocarbons，PAHs）作为一类难降解持久性有机污染物，具有“三致”特性、生物蓄积性和长期残留性，化石燃料和生物质燃料燃烧，垃圾焚烧，生活中“三废”的排放，钢铁（炼焦）与石化行业的加工生产过程，交通运输过程，溢油/石油泄漏等途径是人为污染的主要来源。PAHs对人类的健康和生态环境具有潜在危害，是环境领域重点关注的污染物之一。
【研究目的】克雷伯氏菌KL可以以多环芳烃作为唯一碳源和能源进行生长，本课题拟用菲、荧蒽和芘作为目标PAHs化合物，对PAHs特征降解菌KL进行驯化、生理生化特性分析和分子生物学鉴定，实验结果可为PAHs污染的生物修复研究提供基础数据与理论支撑。 【研究意义】目前，生物修复是治理PAHs污染的重要方式之一，微生物可将PAHs作为唯一碳源进行降解，进而将其转化为无害的无机物质。环境中PAHs和微生物具有多样性特点，而单一菌种只有在特定环境下对某些特定的PAHs具有较好的降解效能。因此可能仍有许多未鉴定出的PAHs降解细菌。本课题可为PAHs污染的生物修复研究提供基础数据与理论支撑，对于监测PAHs污染土壤中不同PAHs分解代谢基因型具有参考价值，以进一步探求对PAHs的有效生物修复。 |
2. 研究内容和预期目标
本论文研究主要内容：
（1）pahs特征降解菌的筛选；
（2）菌株的扩培；
3. 研究的方法与步骤
研究方法：从含pahs污染的环境中分离出细菌，对降解菌进行分离、纯化，得到了一系列菌株，分离具有较好降解pahs的菌株。在其中选取降解效果较为明显的菌株，对其进行形态与理化性质的测定以及优化培养。并对于降解菌降解能力进行测定。并调整底物浓度探究不同浓度pahs对降解率的影响。添加其他降解菌来探究混菌对底物降解的影响。添加一定浓度的蒽来探究对于其对于降解菌降解率的影响。
实验步骤：
1.本论文从含pahs污染的环境中分离出细菌，利用涂布平板法和平板划线法对降解菌进行分离、纯化，得到了一系列菌株，针对分离出来的菌株利用平皿法具有较好降解pahs的菌株。在其中选取降解效果较为明显的菌株，对其进行形态与理化性质的测定以及优化培养。使用16s rna 序列分析法进行分子水平鉴定。以 ctab / naci 法提取菌的总dna为模板，p1和p2通用引物对菌的16s rna进行扩增，测序后，在ncbi数据库中进行序列比对，获得种属信息。
4. 参考文献
| [1] LiXiaozhou,PengDanliu,ZhangYue,etal.Klebsiellasp.PD3,aphenanthrene(PHE)-degradingstrainwithplantgrowthpromotingpropertiesenhancesthePHEdegradationandstresstoleranceinriceplants..2020,201:110804. [2] XuX,ZhouH,ChenX,etal.BiodegradationpotentialofpolycyclicaromatichydrocarbonsbyimmobilizedKlebsiellasp.insoilwashingeffluent[J].Chemosphere,2019,223(MAY):140-147. [3] 曹军伟. 深海多环芳烃降解菌Celeribacter indicus P73~T降解荧蒽和菲的机制研究[D].哈尔滨工业大学,2016. [4] 曹云者,柳晓娟,谢云峰,张大定,李发生.我国主要地区表层土壤中多环芳烃组成及含量特征分析[J].环境科学学报,2012,32(01):197-203. [5] 陈铮,陈勇.多环芳烃降解菌的研究进展[J].浙江万里学院学报,2019,32(03):66-70. [6] 龚莹,王海花,马思远,林雨彬,刁晓平.海南红树林沉积物中多环芳烃降解菌群组成及降解率的比较研究[J].生态环境学报,2020,29(05):1005-1013. [7] 贺赟. 多环芳烃菲降解人工双菌体系的构建及其代谢交流分析[D].天津大学,2018. [8] 侯梅芳,潘栋宇,黄赛花,刘超男,赵海青,唐小燕.微生物修复土壤多环芳烃污染的研究进展[J].生态环境学报,2014,23(07):1233-1238. [9] 侯晓鹏,叶春,李春华,郑向勇,许士洪,郭士林.低氧条件下不同电子受体对克雷伯氏菌降解菲的影响[J].环境科学研究,2016,29(02):227-233. [10] 侯晓鹏.低氧条件下克雷伯氏菌Klebsiellasp.ZS1对菲降解特性研究[D].东华大学,2016. [11] 孔令姣.石油污染土壤的生物修复及细菌多样性研究[D].兰州理工大学,2017. [12] 李梦娇,彭晟,徐绍忠,余代宏,赵明富,文国松.克雷伯氏菌在农业与环境治理上的应用[J].生物技术进展,2014,4(06):415-420. [13] 刘鑫鑫. Burkholderiafungorum FM-2对菲的降解及重金属耐受性研究[D].天津理工大学,2019. [14] 吕鑫,孙延瑜,闵军,胡晓珂,马莲菊.微生物降解土壤中多环芳烃的研究进展[J].安徽农业科学,2020,48(04):1-7. [15] 唐涛涛,李江,杨钊,向福亮.多环芳烃生物降解及转化途径的研究进展[J].石油学报(石油加工),2019,35(02):403-413 [16] 肖盟,尹向阳,马红蕾,孙梦,华夏,李坤,宋红兵,盖恒军.多环芳烃降解菌的筛选及其降解性能的强化[J].煤炭科学技术,2018,46(09):75-80. [17] 杨滨银. 多环芳烃菲降解菌的筛选、鉴定及其在土壤修复中的应用研究[D].新疆大学,2013. [18] 杨晓磊,陆贻通,曹林奎.多环芳烃荧蒽降解菌的筛选鉴定及降解特性研究[J].科技通报,2007(01):46-51. [19] 张春杨,崔艳梅.萘降解菌NAP2-2的16S rRNA基因克隆和系统发育分析[J].安徽农业科学,2007(30):9472-9473 9533. [20] 周子康,崔洁,许平,唐鸿志.细菌降解低分子量多环芳烃的研究进展[J].生物工程学报,2019,35(11):2069-2080.
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5. 计划与进度安排
| 进度安排：2022年12月28日—2022年6月13日 1、第17周（20-21-1学期）-第3周（2022年12月28日--2022年3月21日）：根据和导师讨论确定的论文题目，大量阅读文献，其中选择10篇以上参考文献（外文1-2篇或以上）进行深入阅读，参照任务书写出开题报告。选择一篇外文（5000字以上，文献内容要结合本研究内容）进行全文翻译。 2、第4周（2022年3月22日--2022年3月28日）：在充分调研文献的基础上，制定实验具体实施计划，进行试验研究的前期准备工作； 3、第5周-第11周（2022年3月29日--2022年5月16日）：根据任务内容实施试验，包括克雷伯氏菌KL的形态及鉴定，克雷伯氏菌KL对不同PAHs的降解特性研究，以及对PAHs的降解条件优化等； 4、第12-15周（2022年5月17日--2022年6月13日）：论文的撰写以及答辩阶段。在完成论文全部试验后，对试验数据进行分析，归纳整理以及分析讨论，撰写论文（字数15000字以上）。毕业论文撰写格式和打印要求按照学院统一标准，最后进行毕业论文答辩。 |
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