构建竞争性酶联免疫吸附法的研究开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景：

农药残留是危害食品安全的重要原因之一，因此，建立简单、快速、灵敏的农药检测技术成为解决农残问题的重中之重。

目前，检测农药的方法主要有高效液相色谱法、液相－质谱联用法，气相－质谱联用法、酶联免疫分析法、胶体金免疫层析法等。仪器分析方法分析精度高，可实现多组分连续检测，是目前很多国家农药检测的官方标准方法，但该方法需要复杂的样品前处理过程以及昂贵的设备和专业操作人员，不适合现场快速检测。酶联免疫法与胶体金法具有检测速度快，操作简单，试剂容易保存，人员的工作风险可在一定程度上降低等优点，缺点则是灵敏度较低。免疫学检测技术由于具有低成本、高敏感度、简单快速和适合批量检测等优点，已逐渐成为一种重要的农残检测手段，其中酶联免疫吸附检测（elisa）研究最为广泛。

2. 研究内容和预期目标

预期目标：

本课题拟构建一种有机磷农药的竞争性elisa检测方法，对包被抗原、封闭微孔板、抗体、二抗进行优化，为开发elisa检测试剂盒打好基础。

研究内容包括：

3. 研究的方法与步骤

1.实验仪器的准备与操作：酶标仪，纯水机，烘箱，ph计，天平，水泵，水浴箱

2.实验试剂的配制：

准备抗体抗原标品，用pbst将抗原进行梯度稀释，用cbs将抗体进行梯度稀释

4. 参考文献

[1] 刘运清, 李岩松, 乔斌, 等. 3 种有机磷农药间接竞争elisa检测方法的建立[j]. 农药, 2017, 56(10): 746-749.

[2] 柳双, 王敏思, 谢春花, 等. 食用菌中硫酸链霉素残留的免疫快速检测[j]. 食品研究与开发, 2020, 41(14):163-168.

[3] 李红梅,陈佳,徐斐, 等. elisa测定中tmb显色体系的优化及其稳定性研究[j]. 生物技术通报, 2010, (2):126-130.

5. 计划与进度安排

（1）2022-2022-1学期17~19周和2022-2022-2学期第1周~第4周（2022.12.28~2022.3.28）：查阅资料，准备开题报告，外文论文翻译；

（2）第5周~第6周（2022.3.29~4.11）：预实验，配制相关试剂，练习微孔板的包被、封闭、加样、洗板、显色等操作方法，学习使用酶标仪；

（3）第7周~第11周（2022.4.12~5.16）：构建竞争性elisa检测方法，优化孵育条件、封闭条件、抗原浓度、抗体浓度、二抗稀释度等，确定合适的制板条件；