1. 研究目的与意义
天然药物在癌症治疗中做出巨大的贡献，在抗癌药物中的占比高达27%左右，如紫杉醇、多西他赛、长春瑞滨、榄香烯等等[1-3]。常规天然产物分离提取方法多以萃取、超声、有机回流、索氏提取、微波、色谱（硅胶柱、大孔吸附树脂）等为主。但，一方面天然产物具有中所含成分复杂、多样，且含量低的特点，常规方法可能难以高效、快速、便捷的获取活性成分；另一方面，常规分离手段与活性检测、作用机制等研究呈现分散状态，难以特异地找寻特定靶蛋白的潜在活性成分。因此，如何快速、高效、特异性地进行靶向分离筛选天然产物成为亟待解决的关键节点。
超滤（ultra-filtration，uf）是以压差为驱动力的膜分离技术。该技术选用不同孔径的不对称性微孔膜，溶质和悬浮物料按大小不同而分离，比膜孔小的物质和溶剂一起透过膜，而较大的则被截留。uf技术具有操作简单，无相变化，物质性能和活性可完整保留等特点。近年来，超滤技术的应用范围也已拓展到天然产物筛选之中。du p等人使用uf/uplc-ms联用方法检测血浆中游离多西紫杉醇的方法[4]；潘远江等用采用uf技术筛选到topo ii异构酶的抗肿瘤活性成分[5]；wan j等人采用uf技术从中药中筛选到具有保护血管免受h2o2刺激的有效成分[6]。
本论文旨在以体外重组蛋白rsk2为受测蛋白；以枇杷叶、苍术等粗提物为待测物，uf分离潜在结合成分，结合hplc-ms，找寻潜在抗肿瘤活性成分。
2. 研究内容和预期目标
本论文旨在以体外重组蛋白rsk2为受测蛋白；以枇杷叶、苍术等粗提物为待测物，uf分离潜在结合成分，结合hplc-ms，找寻潜在抗肿瘤活性成分。
本论文的主要研究内容如下：
3. 研究的方法与步骤
1、采用浸提、有机回流获得枇杷叶、苍术等粗提物；
2、分离纯化体外重组蛋白rsk2；
3、uf超滤分离，收集洗脱组分；
4. 参考文献
| [1]超滤在药学分析测定中的应用徐缓，张伟，邓意辉.药物分析杂志 Chin J Pharm Anal 2013，33( 5). [2]超滤-质谱技术在中药活性成分筛选中的应用进展张 慧，徐 聪，吴媛媛，中草药Chinese Traditional and Herbal Drugs 第49卷 第23期 2018年12月. [3]苍术抗炎、抗肿瘤和免疫调节作用的研究进展张明发，沈雅琴.DrugEvaluation Research 第39卷 第5期 2016年10月. [4] Du P, Han X,Li N, et al. Development and validation of an ultrafiltration-UPLC-MS/MSmethod for rapid quantification of unbound docetaxel in human plasma[J].Journal of Chromatography B, 2014, 967:28-35. [5]潘远江, 张虹, 陈耀祖,等. 生物亲合超滤HPLC/ESI-MS快速筛选抗癌活性成分的研究[J]. 科学通报, 2002, 47(17):1305-1308. [6]Wan J, Yin Y,Sun R, et al. Protective effect of the ultra-filtration extract from Xin MaiJia on human aortic smooth muscle cell injury induced by hydrogenperoxide[J]. Experimental Therapeutic Medicine, 2014, 7(1):11. [7]超滤在黄酮类化合物分离中的研究进展.韩伟,闰雨,潘佳伟.中国制药装备.2012年11月.第11辑. [8]超滤法测定喜树碱的血浆蛋白结合率.刘英,李沙沙,吴晓松.中国医院药学杂志2016年11月第36卷第22期. [9]HPLC-超滤法测定雷公藤红素与家兔、大鼠、人血浆的蛋白结合率.刘鹏,陈莹.中国药房2015年第26卷第1期. [10]超滤法结合 HPLC 法测定白藜芦醇的血浆蛋白结合率.鲍慧玮,侯晓琳,刘芳馨.中国民族民间医药2016年10月第25卷第20期.
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5. 计划与进度安排
2022-2022-1学期第17-20周-2022-2022-2学期第1-4周 查阅文献，完成开题报告的撰写。对枇杷叶、苍术等进行粗提；
第5-7周 分离纯化体外重组蛋白rsk2；
第8-9周 uf超滤分离；
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