抗HSA单域抗体及其融合蛋白的亲和层析纯化方法研究开题报告

1. 研究目的与意义

1. 研究背景

单域抗体（single domain antibody，sdab）最早于20世纪90年代在骆驼科动物中被发现，之后在护士鲨、大星鲨和鳐鱼等软骨鱼纲动物中也发现了类似抗体。一般传统的igg抗体由重链和轻链部分共同组成，而单域抗体天然缺失轻链只有重链可变区，故而相比于传统抗体其分子量更小、结构也更加简单，也被称为纳米抗体（nano body）。单域抗体虽然结构简单但仍然可以达到与传统抗体相当甚至更高的与特异性抗原的亲和力，，而且单域抗体的稳定性强、易于重组表达。

经过了近30年的研究，单域抗体由于分子量小、理化特征稳定、亲和力高、半衰期较短、易于重组表达和免疫原性相对较低等优势，在免疫研究、诊断检测、医学和生物成像、治疗性抗体和融合抗体等领域均得到了飞速的发展。据统计，截至2016年，美国食品药品管理局（fda）共批准上市了66个抗体药物，平均每年上市约2.5个抗体药物，纳米抗体的应用前景广阔。纳米抗体在不同的领域都有应用，如复旦大学基础医学院姜世勃团队表明其建立快速制备抗体平台筛选的sars-cov-2单域抗体具有潜在的抗病毒活性[1]。如纳米抗体在标记上有机染料后可以应用于超分辨率显微镜成像[2]等。

2. 研究内容和预期目标

1. 主要研究内容

本研究基于实验室的前期实验构建的抗hsa的单域抗体融合蛋白及其表达载体，进行多步骤的纯化以制备高纯度的标准蛋白。利用cnbr-4b活化填料偶联has及标准蛋白探究制备填料的理想条件，并探究制备填料的稳定性、再生性等性质，优化制备填料的的纯化条件，并测试制备填料在纯化蛋白时的实际表现。

2. 预期目标

3. 研究的方法与步骤

1. 试剂及材料准备

1.1 lb液体培养基

4. 参考文献

[1] yan l. w.,cheng l.,shuai x., et al. identification of humansingle-domain antibodies against sars-cov-2[j]. cell host microbe,2020,27(6):854-856.

[2] begein e.,gettemans j.. nanobody technology: a versatiletoolkit for microscopic imaging, protein-protein interaction analysis, andprotein function exploration.[j]. frontiers in immunology,2017,8:1-14

[3]董斌,王忠,骆阳,李庆,段涛,等. 双特异纳米抗体的融合表达、纯化及活性分析[j].中国生物制品学杂志,2018,31(12):1322-1325 1332.

5. 计划与进度安排

1、第17周（20-21-1学期）-第2周（2022年12月28日--2022年3月14日）接受任务、查阅和翻译文献、撰写及完成开题报告

2、第3周（2022年3月15日--2022年3月21日）cnbr-4b活化填料的处理；

3、第4周-第7周（2022年3月22日--2022年4月18 日）cnbr-4b活化填料效率和载量的测定；