筑波链霉休眠与唤醒特征初步研究开题报告

1. 研究目的与意义

他克莫司(tacrolimus， fk506)，商品名prograf，是从链霉菌的代谢物中分离得到的一种大环内酯类新型免疫抑制剂，于1989年用于临床。

当前，他克莫司已广泛应用于抑制器官移植排斥反应和多种自身免疫疾病的治疗，特别是环孢素无效患者或因不良反应不能继续使用环孢素的患者，取得了良好的治疗效果。

通过研究筑波链霉菌的休眠与复苏状态中抗生素的产量，可以得到休眠状态中筑波链霉菌的代谢状态，从而更好地培养筑波链霉菌，并利用其代谢产物。

2. 研究内容和预期目标

针对实验室已有的筑波链霉菌突变株，初步研究该菌株在休眠和活动状态的生理生化特征，具体研究内容包括：（1）研究休眠和活动状态下菌体的形态变化。

（2）采用hplc，lc-ms等仪器，分析研究菌种在休眠和活动状态下的特征代谢物变化。

（3）探索不同休眠状态下，菌种激活后产脂类和多糖的变化差异等。

3. 研究的方法与步骤

一、菌种的活化与培养 1、取处于休眠状态中的筑波链霉菌菌种，于分离斜面培养基中进行活化培养。

2、将活化的菌种进行种子培养基培养。

开紫外灯将洁净工作台灭菌30min后关闭紫外灯，用被酒精灯火焰烤热的接种环将斜面菌种接到灭好菌的种子培养基中，每瓶接2～3环。

4. 参考文献

［1］丁春雷. 他克莫司治疗药物监测研究进展［J］.中国药房, 2008, 29（20）: 1580-1583［2］杨文革. 发酵法生产他克莫司的研究进展［J］.现代化工, 2008, 28（2）: 34-37［3］杨文革. 发酵法生产子囊霉素的研究进展［J］.化工进展, 2010, 29（7）: 1309-1313［4］Hatanaka H, Kino T, Asano M, Goto T, Tanaka H, Okuhara M. FK-506 related compounds produced by Streptomyces tsukubaensis No. 9993. Journal of Antibiotics, 1989, 42（4）: 620-622［5］徐亲民. 他克莫司的工业化研究［J］. 国外医药抗生素分册, 2000, 21（4）: 151-155［6］刘忠. 他克莫司发酵条件的研究［J］.齐鲁药事, 2008, 27（10）: 687-689［7］Tur漁 J, Gajzlerska W, Klimaszewska M, Krl M, Dawidowski M, Gutkowska B . Enhancement of tacrolimus productivity in Streptomyces tsukubaensis by the use of novel precursors for biosynthesis [J]. Enzyme and Microbial, 2012, 51（6-7）: 388 395［8］沈向红;保健食品中粗多糖测定方法研究[J];实用预防医学;2001年06期［9］李蔚，赵有玺，王忠民，龚平.液体发酵羊肚菌胞外多糖测定方法的研究.食品科技，2008，07［10］刘永乐等.食品工业科技.用分光光度法测定发酵液中液体脂肪的含量.2004（6）：108111

5. 计划与进度安排

一、2022.12-2022.3阅读相关参考文献，了解休眠状态菌的活化，以及菌种处于休眠状态中大致的物质代谢和形态变化，结合参考文献，设计初步的实验思路，完成开题报告，结合实际完成初步的实验步骤设计。

二、2022.3-2022.4对休眠的筑波链霉菌菌种进行活化及发酵培养，结合参考文献设计具体的实验步骤，观察筑波链霉菌的休眠及激活状态时的形态变化，对休眠状态及激活状态菌进行代谢物质的定量定性检测，初步研究休眠体系和激活体系中的代谢物分布特征。

三、2022.5.1-2022.5.31对发酵培养的筑波链霉菌进行休眠处理，得到不同休眠时期的筑波链霉菌，观察其形态和物质代谢，与同等时间进行发酵培养的筑波链霉菌进行比较分析，筑波链霉菌产多糖和脂类的定量定性分析。