环境因子对球头三型孢菌NADPH及代谢的影响开题报告

1. 研究目的与意义

研究背景：

赤藓糖醇是一种采用生物技术生产的新型发酵型低热量甜味剂， 1999年6月国际食品添加剂专家委员会（jecfa）批准赤藓糖醇作为食用甜味剂，且无需规定adi值。目前，赤藓糖醇在美国、日本、澳大利亚、新西兰、新加坡、韩国、墨西哥等国已用于食品生产。2007年6月19日我国卫生部公告批准赤藓糖醇作为甜味剂应用于口香糖、固体饮料、调制乳等食品中。但是，国内对赤藓糖醇的研究起步较晚，赤藓糖醇的产量不高。据日本专利报道，球头三型孢菌可以耐受20%-60%的葡萄糖，通过磷酸戊糖途径生产赤藓糖醇

nadph，叫还原型辅酶Ⅱ，在很多生物体内的化学反应中起递氢体的作用，具有重要的意义。nadp ，辅酶Ⅱ，是nadph的氧化形式，主要作为脱氢酶的辅酶，在酶促反应中起递氢体的作用。nadph通常作为生物合成的还原剂，并不能直接进入呼吸链接受氧化。只是在特殊的酶的作用下，nadph上的h被转移到nad 上，然后以nadh的形式进入呼吸链。研究目的：在5l发酵罐中探究不同ph对球头三型孢菌菌体生长、多元醇产量以及葡萄糖消耗的影响，同时通过测定nadph的含量，研究球头三型孢菌代谢与nadph含量之间的关系。

2. 研究内容和预期目标

研究内容：

3. 研究的方法与步骤

研究方法：多元醇产量测定及nadph含量测定采用hplc；菌重测定采用细胞干重法；葡萄糖消耗测定采用sba生物传感仪法。

步骤：1.每隔12h从发酵罐中取样，取1ml的样品并离心，留上清后加入清水并搅匀后再离心，弃上清后加入玻璃珠和相应的裂解液，搅匀并震荡10min,再放入4°c的离心机中离心，取出上清并做好标记。并取5ml的发酵液离心，得到菌体且做好标记备用。

2.发酵结束后，将每次取出的上清依次稀释适当浓度后，用0.22微米的滤膜过滤，并做好标记，打开液相，在控制方法中将吸光度调至340nm,更改好到适当的路线后，先进一针标准品，然后依次进样品，等待数据结果，选择积分事件将对应的3.6分钟的数据记录并做曲线图

4. 参考文献

[1] 刘俊梅,王辉,李琢伟等.赤藓糖醇合成途径及关键酶的研究进展[j].粮油加工（电子版）,2015,(5):58-61,65.

[2] 李雨,秦海青,邱学良等.国外对赤藓糖醇生物合成途径及优化策略的研究[j].齐鲁工业大学学报,2013,(3):41-45.

[3] 葛驰宇,张君丽,陈建华等.高效液相色谱法同时测定发酵液中赤藓糖醇和l-赤藓酮糖的含量[j].色谱,2012,30(8):843-846.

5. 计划与进度安排

2022年12月1日-2022年12月31日

课题文献阅读，调研，初步确定研究方案。

2022年2月15日-2022年3月15日