过表达Circ-AKT2细胞系构建及 Circ-AKT2功能初步研究开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

环状 rna（circular rna，circrna）是一类广泛存在于哺乳动物细胞中的特殊 rna 分子，通常由前体 mrna（precursor messenger rna，pre-mrna）经可变剪切产生[1]。

circrna 最早于20世纪70年代在rna病毒中被发现[2]，1979年，研究者利用电子显微镜第一次在真核细胞胞质中观察到以环状的形式存在rna 分子[1]，人们又在酵母的线粒体中发现了circrna[3]。

1993年，研究者在人类细胞中也发现了一些由外显子构成的circrna[4]。

2. 研究的基本内容和问题

研究的目标丝/苏氨酸蛋白激酶(serine-threoninekinase，akt)也被称为蛋白激酶b(proteinkinaseb，pkb)，分子量约为57kd，处于多条信号通路的重要交叉点，通过影响下游多种因子的活化状态，发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用。

akt/pkb参与细胞存活主要通过直接调控凋亡蛋白、调节转录因子、控制代谢方式三种方式来实现。

近年来，不断的研究使人们对akt生物学作用的了解更加深入，其分子特性及作用靶点逐步被阐明，而且它在细胞凋亡、增殖、血管再生、新陈代谢、细胞迁移中也起的作用也有了重大突破。

3. 研究的方法与方案

研究方法细胞培养：把293t细胞传到6个 75cm 正方斜颈细胞培养瓶里，在 5%二氧化碳培养箱里 37℃培养24 小时至细胞长满单层。

rna提取及反转录按照vazyme公司trizol说明书提取细胞rna样品，并非对其纯度和含量进行检测。

按照thermo公司反转录试剂盒进行反转录rna成cdnacirc-akt检测设计引物对circ-akt进行扩增，检测akt肯能存在的位点。

4. 研究创新点

丝/苏氨酸蛋白激酶(serine-threoninekinase，Akt)处于多条信号通路的重要交叉点，通过影响下游多种因子的活化状态，发挥着抑制凋亡、促进增殖的关键作用。

其circRNA无人报道，其功能仍未知，对其他基因是否具有调控作用需待研究。

5. 研究计划与进展

2016．5.5-2016.6.5首先在细胞检测akt基因是否能形成circrna。

如果有寻找成环位点。

2016.6.6-2016.7.6分段扩增circ-akt的全长。