小麦抗病通路多个关键基因聚合表达载体的构建开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

小麦在整个生长期内，常受到锈病、白粉病、赤霉病、纹枯病、黄花叶病毒等多种病害的危害。

这给生产带来了巨大的损失。

培育和应用抗病品种是最经济、安全、有效的防治方法。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：成功运用golden gate技术构建多个小麦抗病基因聚合表达载体。

研究内容：用golden gate克隆法构建小麦多个抗性基因聚合表达载体。

具体是在同一反应体系中，利用iis型限制性核酸内切酶，在识别位点之外切开dna，产生含粘性末端的dna片段，同时用t4连接酶将几个dna片段按照既定的顺序连接。

3. 研究的方法与方案

研究方法：将目的片段PCR扩增，琼脂糖凝胶电泳验证后，用cleanup试剂盒或胶回收扩增产物；（L0阶段）经BSA-1酶切T载体连接后导入大肠杆菌感受态（DH5α，DH10B），蓝白斑筛选，挑单克隆进行菌落PCR，琼脂糖凝胶电泳鉴定后摇菌培养，送公司测序进一步验证，测序结果比对；（L1阶段）质粒小提试剂盒提质粒，经BBS-1酶切T载体连接后导入大肠杆菌感受态（DH5α，DH10B），蓝白斑筛选，挑单克隆进行菌落PCR，琼脂糖凝胶电泳鉴定后摇菌培养，送公司测序进一步验证，测序结果比对；将L1阶段的5个基因质粒聚合，BSA-1酶切T载体连接后导入大肠杆菌感受态（DH5α，DH10B），挑单克隆进行菌落PCR，琼脂糖凝胶电泳鉴定后摇菌培养，送公司测序进一步验证，测序结果比对。

技术路线：如下图（LO阶段）L1阶段） L2阶段） 可行性分析：此方法经试验研究人员反复采用，可行性很高。

4. 研究创新点

利用Golden Gate技术将不同类型的小麦抗性基因聚合在一起的报导不多，而本研究结合Golden Gate

5. 研究计划与进展

2016.07-2016.12调查研究，资料文献收集阅读。

2016.07-2016.12实验操作学习。

2016.09-2016.10完成lo阶段载体构建一系列任务。