1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
枸杞是中国传统药食同源物质中常见的一味药材,具有上佳的营养价值,在国内外均享誉盛名,其果实、根、叶、芽、花粉以及枸杞籽等均可入药,受到历代养生家、医学家的喜爱与推崇。现代研究表明,枸杞具有广泛的保健与药用功效,包括抗氧化、预防心脑血管疾病、增强免疫、抗疲劳、降血糖、抗肿瘤、护眼等作用[1-7]。
2-o-β-d-葡萄糖基-l-抗坏血酸(aa-2βg)是一种近年来被发现存在于枸杞中的天然的抗坏血酸衍生物,其目前仅在枸杞中被发现,含量约为红果枸杞干重的0.5%[8]。aa-2βg的特征是具有与维生素c(aa)相当的生物活性,且属于稳定维生素c类似物。aa-2βg由于在维生素c分子的c2羟基上有葡萄糖基存在,使抗坏血酸母环固有的连烯二醇结构得以掩蔽,从而不易被氧化为脱氢型抗坏血酸,提高了维生素c的稳定性。
1 aa-2βg的生物活性
2. 研究的基本内容和问题
肠道菌群对于免疫起到重要作用,而枸杞及aa-2βg对肠道菌群具有调节作用,因此aa-2βg可能通过调节肠道菌群增强机体免疫。
但是目前尚无任何关于aa-2βg免疫调节相关活性方面的研究。
ctx诱导的小鼠模型是研究物质免疫调节活性最常用的体内模型。
3. 研究的方法与方案
实验方案符合国家实验动物福利实验指南及动物实验伦理规范,并通过南京农业大学动物实验中心(许可证号:syxk-(苏)-2011-0036)批准。实验于南京农业大学动物中心spf级实验动物房进行,严格控制环境温度24-25℃,湿度70-75%,12小时昼夜循环。
实验需50只spf级雄性balb/c57小鼠(20.0 ±0.5 g,4周),随机分5组(每组10只),分别为正常对照组、模型对照组、粗提物组、低剂量组以及高剂量组。自由饮水饮食适应性饲养一周后,正常对照组(nc组)、模型对照组(mc组)、灌胃200ml 100 mg/kg/daa-2βg组(aa组),连续灌胃6周。灌胃过程中,每隔两天正常对照组腹腔内注射一次生理盐水,其他4组腹腔内注射80mg/kg/天的ctx,建立免疫抑制模型,对比预防效果。收集血样后,拉颈处死。实验期间,每天测量体重,每四天测量一次食物消耗量。血液离心以收集血清于4℃冰箱存放。将肝脏、盲肠内容物和粪便收集在无菌离心管中,并在-80℃下保存。收集结肠并储存在-80℃下用于rna提取。用10%福尔马林固定空肠用于切片分析。收集胸腺和脾脏并称重,胸腺和脾脏指数计算如下:胸腺/脾脏指数=胸腺/脾脏重量(mg)/小鼠体重(g)
脾脏组织切片的扫描与观察
4. 研究创新点
多糖是目前用于免疫调节的主要天然生物活性物质。但由于多糖结构复杂,寻找天然小分子活性物质作为新的免疫调节物质具有重要意义。本研究的主要目的是研究AA-2βG通过调节肠道菌群结构而发挥其在CTX诱导的免疫抑制小鼠中的免疫调节效应。这将是首个关于AA-2βG免疫调节作用的研究,也是首次研究AA-2βG对回肠微生物的调节作用。
5. 研究计划与进展
2019.11-2019.12 动物实验
2019.12-2020.1 相关样品检测
2020.2-2020.3 数据处理与分析
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