自噬调控基因VAMP8重组敲除质粒的生产线设计开题报告

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

课题意义：

自噬是一种细胞在营养不足、缺氧、缺乏生长因子等各种应激状态时的细胞内自我降解过程，广泛存在于真核细胞内^[1]。细胞能够通过此过程更新细胞器，满足细胞本身的代谢需求。同时，受损细胞通过自噬这一防御机制，清除细胞内受到损伤的细胞器和各种生物大分子物质，维持细胞的代谢平衡和内环境的稳定。可溶性n-乙基马来酰亚胺受体蛋白（soluble n-ethylmaleimide-sensitive factor receptor），简称为snare蛋白，它是一种小型蛋白质的超家族，含有超过35个大小和结构不同的蛋白成员^[2]。它在多种膜融合过程中发挥了重要作用。在自噬中，从自噬体的形成到自噬溶酶体的形成，涉及了多种snare蛋白参与的膜融合过程。囊泡相关膜蛋白8（vesicle-associated membrane protein 8，vamp8）是snare蛋白家族中的一员，其编码基因位于2号染色体。vamp8蛋白位于溶酶体膜上，在自噬溶酶体的形成过程中起到重要作用。探究vamp8蛋白在自噬体与溶酶体的融合过程中的调控作用和分子机制，我们需要通过多种手段，比如基因敲除等。本课题通过研究构建自噬调控基因vamp8敲除载体的最佳方法，辅助进行基因敲除实验。

国内外研究概况：

2. 研究的基本内容和问题

研究目标：

1. 构建vamp8基因敲除载体

2. 探究构建vamp8基因敲除载体的最佳方法

3. 研究的方法与方案

研究方法

1. 酶切线性化载体，用酶将crispr/cas9敲除载体px459线性化。

2. 根据胶回收试剂盒说明书进行胶回收操作。

4. 研究创新点

目前，关于介导自噬体与溶酶体的相关蛋白研究内容较少。

vamp8蛋白在自噬溶酶体的形成过程中起到了重要作用，但其作用机制比较复杂，相关研究较少。

本课题中所作的研究，即探究vamp8基因敲除载体的最佳构建方法，能够有效帮助解决上述问题。

5. 研究计划与进展

2020.2-2020.3：构建VAMP8基因敲除载体实验，确定最佳方法；

2020.4-2020.5：完成所有数据整理和毕业论文的书写。