1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
1、研究意义在pcr操作过程中,最容易出现污染问题,而ung对dna 复制中错配的尿嘧啶以及因胞嘧啶脱氨基造成的尿嘧啶有移除作用,在保持基因组的完整性方面发挥着至关重要的作用,能够防污染。
并且只有高纯度的蛋白才能更好的发挥作用,所有本科题需要研究ung蛋白表达纯化。
2、国内外研究概况早在1974年lindahl,t和duncan等人以含尿嘧啶的dna为底物,分别在大肠杆菌和枯草杆菌中发现了ung。
2. 研究的基本内容和问题
1、研究目标从理论上研究UNG蛋白表达纯化,以揭示UNG蛋白表达纯化的机理,从而探明UNG蛋白表达纯化所需的方法2、研究内容UNG蛋白表达纯化所需的方法以及UNG在分子诊断防污染中的应用3、拟解决的关键问题3.1通过不同蛋白间内在的相似性与差异,利用各种蛋白间的相似性来除去非蛋白物质的污染,而利用各蛋白质的差异将目的蛋白从其他蛋白中纯化出来。
3.2通过研究UNG的生物学特性来应用于分子诊断防污染
3. 研究的方法与方案
1、技术路线 筛选可溶性好的ung菌种;用pei,硫酸铵分级沉淀等方法初沉;用亲和层析、阴离子交换等方法精纯;2、研究方法及实验方案2.1筛选菌种。
小量表达含有不同标签ung的菌种,用sds-page检测不同菌种的可溶性。
2.2用0.1%,0.2%,0.3%,0.4%的pei和30-40%,40-50%,50-60%,60-70%的硫酸铵分级沉淀来摸索蛋白初沉的条件。
4. 研究创新点
利用PEI,硫酸铵分级沉淀等方法初沉,使蛋白粗品在精纯前已有较高的纯度。
5. 研究计划与进展
2014.7-2014.8 探索UNG蛋白的表达条件2014.8-2014.10 学习UNG蛋白的初提取2014.10-2014.12 对UNG蛋白进行精纯2015.3-2015.4 探索UNG蛋白的应用前景2015.4-2015.5 对数据进行分析、撰写结题报告预期研究成果: 得到高纯度的UNG蛋白,并确认UNG确实在分子诊断防污染中有重要应用
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