1. 研究目的与意义、国内外研究现状(文献综述)
普鲁兰酶作为淀粉酶的一种,主要应用在淀粉加工工业中,还应用在饲料、纺织等行业,有着巨大的市场和应用前景。
普鲁兰酶对于淀粉支链的水解具有重要作用,然而由于其特殊定位以及复杂的分泌系统,为工业化生产带来障碍。
国内研究工作主要集中在普鲁兰酶产生菌株的筛选等内容,对基因调控、结构功能以及转运分泌途径等相关内容较少,且研究菌种单一,因此我国在普鲁兰酶的研究上距离欧美国家有很大的差距,工业普鲁兰酶完全依赖进口,定价权掌握在少数外国公司手中,近乎垄断的市场供应导致了国内普鲁兰酶高昂的销售价格,极大的限制了国内相关产业的发展。
2. 研究的基本内容和问题
研究目标1.鉴定三株未知菌种2.设计引物克隆该三株菌种的普鲁兰酶基因研究内容1.克隆16srdna首先将菌种接种至液体培养基,发酵培养后,用试剂盒提取全基因组,电泳检验后,割胶回收dna,用试剂盒提取16srdna,纯化,然后送去测序,将测序结果进行序列比对鉴定菌种。
2.克隆酶基因鉴定菌种后,通过生物信息学方法分析相似菌种的普鲁兰酶基因,并设计引物。
克隆实验菌种的普鲁兰酶基因。
3. 研究的方法与方案
本实验运用了分子生物学方法和生物信息学方法,采用了pcr和琼脂糖凝胶电泳,割胶回收dna以及过柱纯化dna等技术。
用分子生物学方法提取回收扩增分离纯化16srdna,用生物信息学方法鉴定菌种,该种鉴定方法具有简单快速准确性高等优点。
16s rdna是细菌的系统分类研究中最有用的和最常用的分子钟,其种类少,含量大(约占细菌rna含量的80%),分子大小适中,存在于所有的生物中,其进化具有良好的时钟性质,在结构与功能上具有高度的保守性,素有细菌化石之称。
4. 研究创新点
特色:本实验运用了16srdna方法,16srdna鉴定是指用利用细菌16srdna序列测序的方法对细菌进行种属鉴定。
包括细菌基因组dna提取、16srdna特异引物pcr扩增、扩增产物纯化、dna测序、序列比对等步骤。
是一种快速获得细菌种属信息的方法。
5. 研究计划与进展
2015年3月-2015年4月:鉴定三株未知菌种2015年4月-2015年5月:设计引物克隆该三种菌株的普鲁兰酶基因
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