水产品中副溶血弧菌检测及污染状况分析开题报告

全文总字数：12054字

1. 研究目的与意义、国内外研究现状（文献综述）

副溶血性弧菌（vibrio parahaemolyticus）属于嗜盐性革兰氏阴性菌，具有较强的致病性，能引起食源性食物中毒及疾病，从而导致地方性流行的胃肠炎暴发，其污染的食物若被食用会引起呕吐、腹泻等症状^[1]，如果病情发展严重可导致脱水、休克甚至死亡，是我国沿海食物中毒和夏季腹泻的重要病原菌。沿海地区常见副溶血性弧菌引起的食品安全问题，近年来该细菌造成的食源性疾病在内陆地区也呈现出了逐年上升的趋势^[2]。

目前国家已有对副溶血性弧菌的检测标准，如国标gb4789.7-2013中就有规定副溶血性弧菌的检测方法和指标。主要是对待检测样品中的微生物进行富集培养和分离培养以获得疑似副溶血性弧菌的菌株，再通过该细菌的生化特点进行生化鉴定，如革兰氏阴性、嗜盐性、氧化酶阳性、甘露醇阳性、赖氨酸脱羧酶阳性等^[3]进行生化鉴定，不涉及分子方面。一般而言，国标法鉴定的真实准确性较高，但步骤较为繁琐且所需时间较长。

免疫学方法可通过制备高特异性抗体，经抗原-抗体专一性结合精准靶向于目标菌，借由免疫传感器、免疫磁珠分离、乳胶凝集、酶联免疫吸附测定、免疫层析检测、免疫荧光显微术等技术，对病原菌实现快速检测，较之传统培养法可有效提高检测效率。

2. 研究的基本内容和问题

研究目标

针对南京市售水产品进行检测，根据副溶血性弧菌检出率分析该致病菌的流行情况和污染率，可更全面地掌握该致病菌的基本信息；同时，由副溶血性弧菌毒力基因的携带情况可分析水产品引发食源性疾病的概率和风险性大小，为该致病菌的污染和预防提供数据支持。

研究内容

3. 研究的方法与方案

研究方法

1.tcbs琼脂培养基分离筛选

副溶血性弧菌不耐酸，生长所需ph为7.0-9.5，不发酵蔗糖，硫化氢试验为阴性。tcbs培养基成分中含胆酸钠、牛胆粉、硫代硫酸钠和柠檬酸钠，可提供较高的ph环境，抑制革兰氏阳性菌和大肠菌群的生长；溴麝香草酚兰和麝香草酚兰作为ph指示剂，蔗糖作为碳源，若微生物可利用蔗糖产酸，则会产生相应变色现象；硫代硫酸钠与柠檬酸铁可反应，作为检测硫化氢产生的指示剂。

4. 研究创新点

1.鉴定方法创新

针对副溶血性弧菌的检测，国家已有相关的检测标准，主要流程是对待检测样品中的微生物进行富集培养和分离培养以获得疑似菌株，再进行生理生化鉴定，不涉及分子方面。一般而言，国标法鉴定的真实准确性较高，但所需时间较长。分子生物学技术虽具有检测快捷的优点，但仅通过基因鉴定可能会有假阳性（或假阴性）结果产生。本实验课题在针对特异性基因进行分子鉴定的同时，结合部分生理生化特性鉴定，可提高分子鉴定的准确性，并简化生理生化鉴定的复杂程度，还可联系二者的检测结果减少待检样品数，提高检测效率。

2.致病率分析

5. 研究计划与进展

2018年12月-2019年1月：确定实验课题，查阅相关文献资料，拟定实验方案并准备相应实验器材及试剂。

2019年2月：采集水产品样品，进行预实验检测，根据结果修改优化实验方案。

2019年3月-2019年4月：针对分离菌株进行分子鉴定，初步确定是否为副溶血性弧菌。